高艳丽，刘 赛

(1.临沂市沂水中心医院临床药学科，山东 沂水 276400;2.青岛大学医学院药理学教研室山东 青岛 266021)

为进一步研究sSAN-FITC负载维生素D3后被Caco-2细胞的摄取情况，本实验采用激光共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope，LSCM)对sSAN-VD3-FITC被Caco-2细胞的摄取进行形态学观察，分析影响摄取的多种因素，使摄取的过程更加直观、可信。

在此基础上采用Caco-2细胞吸收模型对sSANVD3-FITC进行跨膜转运实验研究。因它能为Caco-2细胞提供类似于体内的生长环境，当Caco-2细胞形成单层之后，向肠上皮细胞转化，与小肠上皮细胞结构和功能非常相似，其跨膜转运更加接近体内吸收状况。建立Caco-2细胞模型需要应用Transwell，即跨膜转运装置。它的种类有多种，本实验选用悬挂式、内侧小室底部膜为孔径0.4 μm的聚碳酯膜的Transwell，此种Transwell最适用于药物的跨膜转运研究［1－2］。

跨膜转运实验应用荧光酶标仪检测接受液的荧光强度，定量分析Caco-2细胞对药物的跨膜转运情况，以推测机体对sSAN-VD3的吸收、利用情况，进一步评估应用海藻酸钠经油酸改性后的兼性材料、根据分子自组装原理所制备的纳米粒，作为疏水性营养物质载体的可行性。

1 材料与仪器

1.1 细胞 Caco-2细胞株，购自中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所。本实验采用30～40代。

1.2 药品与试剂 负载VD3的自组装海藻酸钠纳米粒(sSAN-VD3，食品级，中国海洋大学生命科学部);异硫氰基荧光素(FITC，Amresco 0633，美国);鼠尾胶原蛋白Ⅰ型(杭州生友生物试剂有限公司，批号:20080515);荧光黄(上海埃彼化学试剂有限公司，分析纯，批号:2007-01-02);4'，6-二脒基-2-苯基……