孙黔云，叶巧玲，闫银萍

(贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室，贵州贵阳 550002)

补体是免疫系统的重要组成部分，在机体防御、免疫调控中发挥着重要作用［1－3］。但补体在一定病理生理条件下的过度激活会引发炎症和病理损伤［4－6］，尤其是补体的替代途径在多种疾病和病理损伤中扮演了重要角色［7－8］。在这类补体相关疾病和病理损伤研究中，多采用小鼠构建动物模型进行研究。但由于小鼠血清补体的特殊性，采用标准的补体溶血活性测定方法无法测出其经典途径的溶血活性，而替代途径的溶血活性即使能测出，也比较低［9－10］，且所需要的血清量对小鼠实验来说无法承受。因此，构建可用于小鼠血清补体活性测定的新方法具有现实意义。本实验室因开展补体抑制剂筛选评价工作需要，以3个常用品系小鼠的血清补体作为测定材料，采用眼镜蛇毒因子(cobra venom factor，CVF)构建了一种灵敏度高的小鼠血清补体替代途径溶血活性测定的新方法。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及材料 眼镜蛇毒采集于湖南省武陵山区;蛋白分离凝胶和预装纯化柱购自瑞典Amersham Pharmacia Biotech公司;兔抗绵羊红细胞抗体(溶血素)、乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(ethylene glycol-bis(β-aminoethyl ether)-N，N，N'，N'-tetraacetic acid，EGTA)、明胶购自美国 Sigma 公司;其它试剂均为符合实验要求的国产或进口分析纯。绵羊红细胞、兔红细胞和豚鼠红细胞均采自贵阳医学院实验动物中心提供的实验动物，采集的无菌血液经玻珠脱纤维处理后保存于无菌阿氏液中，存放于4～8℃备用。96孔板为德国Greiner公司产品。……