傅升 吕红兵 刘源 何黎升 樊丽娜 金岩

骨形成蛋白（bone morphogenetic proteins,BMPs）家族成员都是通过结合两种丝或苏氨酸激酶受体（即 BMPsⅠ型、Ⅱ型受体）发挥作用的，Ⅰ型、Ⅱ型受体与配体结合形成异聚体，从而将BMPs信号传递给下游作用物[1-3]。目前已发现BMPs对靶细胞的生长、分化以及凋亡具有调控作用，此外还发现BMPs不仅与部分骨源性肿瘤的发生发展有密切关系，而且与部分涎腺肿瘤、胃癌以及前列腺癌等生物行为有关[4-6]，但对BMPs与鳞癌的发生、发展及转移的关系尚不清楚。

为分析和认识BMPs与鳞癌的发生、发展及转移的可能关系，本研究将首次观察BMPs在口腔鳞癌(舌癌细胞系Tca8113细胞)中的表达以及BMPⅡ突变受体基因转染对口腔鳞癌生长的影响，这将有助于深入认识口腔上皮恶变的机理，为今后应用生物技术对口腔鳞癌进行有效治疗提供实验依据。

材料和方法

一、材料

Tca8113细胞由第四军医大学口腔医学院生物实验室提供。FuGENE6 Transfection Reagent Kit、 DIG-DNA labelling and detection kit、BrdU 检测试剂盒为 Boehringer Mannbeim公司产品。Pc-4质粒为含有BMPsⅡ型突变受体cDNA（cDNA由日本KaWaSaKi医学院分子生物所的Nohno教授提供）的真核表达载体。流式细胞仪：Coulter Epics Elite ESP。MTT为美国Sigma公司产品。Cyclin D1、p27单抗及CDK4、p57多抗购自美国Santa Cruz公司，LSAB增强性广谱型免疫组化试剂盒购自丹麦 Dako公司。

二、方法

1.Tca8113细胞培养：用含10﹪胎牛血清的RPMI1640培养液，在37℃、5﹪CO2、饱和湿度下培养，3 d换液1次，传代3～4次使细胞达到良好的生长状态。

2.BMPsⅡ型突变受体基因的转染和鉴定：按试剂盒说明书进行操作和转染后的鉴定。

3.原位杂交：按试剂盒说明书进行标准化的检测。阴性对照用PBS代替探针，用Tca8113细胞培养方法进行培养。……