黄 瀚，李 兵，欧阳林旗2，，李佐军，刘世坤2，

乳腺癌是危害妇女健康的主要恶性肿瘤，复发率和转移率高，化疗可改善乳腺癌治疗效果和提高生存率，但肿瘤细胞产生的多药耐药常使化疗效果不佳并最终导致化疗失败。叶酸受体(folate receptor，FOLR)可介导细胞外叶酸进入细胞内，有研究［1］发现乳腺癌细胞膜上FOLRα表达增加，而利用反义寡核苷酸抑制乳腺癌细胞MDA-MB/435的FOLRα表达后，该细胞对阿霉素(adriamycin，ADR)的敏感性增加了5倍［2］;二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)基因是FOLRα的下游基因，高海德等［3］观察到双突变 DHFR基因(酶活性增高)对大剂量氨甲喋呤(methotrexate，MTX)化疗小鼠骨髓细胞具有保护作用。本实验旨在探讨FOLRα及其下游基因DHFR的表达与乳腺癌细胞多药耐药的关系，并验证DHFR抑制剂甲氨蝶啶能否逆转耐药细胞系MCF-7/ADR的多药耐药(multidrug resistance，MDR)，为临床乳腺癌化疗方案设计提供新的思路。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 人乳腺癌阿霉素敏感细胞系MCF-7和耐药细胞系MCF-7/ADR购自北京大学肿瘤医院;阿霉素(江苏恒瑞医药股份有限公司)，甲氨蝶啶(四川正安医药有限公司);MTT(Sigma公司)，DMSO(Amresco公司)，胎牛血清(杭州四季清生物有限公司)，RPMI 1640培养液(Hyclone公司);RNA提取剂TRIzol、逆转录试剂盒、PCR试剂盒(Fermentas公司);免疫组化试剂盒及鼠抗人P-gp一抗(福建迈新生物技术公司)，FOLRα一抗(Santa Cruz Biotechnology);美国 ABI 2720型 PCR仪;德国Eppendorf公司高速低温离心机;德国Eppendorf生物分光光度仪。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 两株细胞均用含体积分数为10%胎牛血清的 RPMI 1640培养液于37℃、5%CO2饱和湿度培养箱中培养。MCF-7/ADR细胞株培养过程中加入1 μmol·L-1的ADR用以维持其耐药性。定期在倒置显微镜下观察细胞形态与生长状况。……