刘 力，闵 苏，魏 珂

罗库溴铵(rocuronium，Roc)是临床上常用的非去极化肌松剂，能与乙酰胆碱(acetylcholine)竞争性结合神经肌接头突触后膜成人型乙酰胆碱受体(εnAChR)，阻断神经冲动传导，发挥肌松作用。麻醉诱导时采用预注小剂量肌松剂来提高肌松起效时间，但不能增强肌松程度。挥发性吸入麻醉药能够明显增强非去极化肌松剂的肌松作用，两种药物复合用于麻醉诱导能够加快起效时间并提高肌松效果。本实验通过脂质体转染建立表达大鼠ε-nAChR的HEK293细胞模型［1］，比较两种常用的挥发性吸入麻醉药七氟醚(sevoflurane，Sev)和异氟醚(isoflurane，Iso)对不同浓度罗库溴铵与ε-nAChR结合后内向电流的影响，以阐明挥发性吸入麻醉药复合不同剂量非去极化肌松剂的浓度效应关系。

1 材料与方法

1.1 药品和试剂 罗库溴铵标准品，批号:X1-081201，由仙琚公司 (中国)提供。七氟醚、异氟醚购自美国雅培公司。细胞培养和转染相关试剂分别购于美国Sigma公司和Invitrogen公司。

1.2 载体质粒的构建 从成年大鼠骨骼肌匀浆中提取 ε-nAChR 亚基 α、β、δ、ε 基因，分别插入原核细胞表达质粒后通过测序鉴定，再亚克隆到真核细胞表达质粒pcDNA3.1。基因测序鉴定pcDNA3.1α、pcDNA3.1β、pcDNA3.1δ、pcDNA3.1ε 4 种载体质粒连接正确(载体质粒由广州弗尔博生物公司构建)。

1.3 细胞培养 HEK293细胞株(重庆医科大学分子生物实验室提供)在37℃、含5%CO2的培养箱中用DMEM培养基(Hyclone公司 含体积分数为10%小牛血清、1 ×105U·L－1青霉素、100 mg·L－1链霉素、2 mmol·L－1谷氨酰胺)培养24 h。培养2～3 d和实验前用0.25%胰酶消化传代1次(密度为1×105)。

1.4 HEK293细胞脂质体转染及功能鉴定 将pcDNA3.1α、pcDNA3.1β、pcDNA3.1δ、pcDNA3.1ε以2∶1∶1∶1比例与10 μl Lipofectamine 2000(Invitrogen公司，美国)混合，加Opti-MEM培养基至1 ml，孵育20 min后，加入HEK293培养皿中。……