热杀死结核分支杆菌H37Ra诱导的SD大鼠佐剂性关节炎模型研究

2011-11-29陈佩虹陈育尧林晓春苏健淦

中国药理学通报 2011年1期

关键词：模型

陈佩虹，陈育尧，林晓春，苏健淦，佟丽

在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)的实验研究中，大鼠佐剂性关节炎动物模型(adjuvant-induced arthritis，AA)是常用的经典实验动物模型，我们以热杀死结核分支杆菌 H37Ra(Mycobacterium tuberculosis H37Ra，Mtb)成功诱导SD大鼠AA模型，该模型操作简单、临床症状直观，其机体免疫炎症反应、细胞因子网络及关节病理改变等与人类RA临床症状相似［1］。本项研究在前期研究工作的基础上，对Mtb诱导SD大鼠AA模型的血液学、关节滑膜病理、T细胞功能的改变进行分析，以综合评价该模型与临床RA类疾病的相似性。

1 材料

1.1 动物及分组 SPF级SD大鼠24只，♂，6～8周龄，体质量(280±20)g，由南方医科大学实验动物中心提供，动物合格证号:SCXK(粤)2006-0015。动物饲养条件:清洁通风环境，室温(23±1)℃，湿度(50±5)%，光照周期为12 h，自由饮食。适应性喂养7 d后随机分为两组，正常对照组12只，AA模型组12只。

1.2 实验试剂热杀死结核杆菌H37Ra，来自Difco实验室(Detroit，MI，USA);矿物油，美国 Sigma公司产品;红细胞裂解液，Andybio公司产品，批号 090618;Pecy7-CD4、FITCCD25、PE-FOXP3 Rat Antibody及同型对照 Mouse IgG1、FOXP3 Fix/Perm Buffer、Cell Staining，均为 Biolegend 公司产品，批号分别为 B123582、B116371、B119654、B126005、B125798;大鼠淋巴细胞分离液，天津灏洋公司产品，批号20090304;Annexin V-FITC细胞凋亡试剂盒(内含Annexin VFITC、Propidium Iodide 即 PI、Binding Buffer)及 TUNEL 细胞凋亡试剂盒(内含 Equilibration Buffer、Biotin-11-dUTP、TdT Enzyme、50 ×Proteinase K、Streptavidin-HRP、DAB)，均为南京凯基公司产品，批号分别为090725、091125;其它化学试剂购自广州试剂公司，均为AR级;Hanks液、PBS液自备。

1.3 器材 TDL-40B台式离心机，上海安亭公司;LG-R-80血液流变仪，北京世帝公司;BH2荧光显微镜，日本OLYMPUS公司;精密天平，德国Sartorius公司;RM2135切片机、EG1160包埋机、图像采集系统，德国Leica公司;950动物血球分析仪，美国DREW公司;520爪肿测试仪，美国IITC公司;FACS Calibur流式细胞仪，美国BD公司。