刘 倩，郭会彩，2，张丽男，王永利

脑缺血缺氧性疾病在临床上具有发病率高、致残率高、死亡率高的特点，严重威胁着人类的健康。目前认为谷氨酸介导的兴奋性细胞毒性在脑缺血缺氧的病理过程中起重要作用［1］。在神经元缺血缺氧时，NMDA受体是介导神经毒性最主要的受体［2-4］，谷氨酸通过NMDA受体在缺血缺氧所致的神经元损伤中起关键作用［5］。

我室的前期研究已证明［6］，缺血缺氧后，脑组织不仅兴奋性氨基酸释放增多，而且Na+，K+-ATP酶活性明显降低，其高亲合力α2亚基和α3亚基，无论在mRNA水平还是蛋白水平均明显降低，而低亲和力的α1亚基则无明显改变［7］，提示Na+，K+-ATP酶高亲合力α亚基参与了脑缺血缺氧性损伤。本实验选取对缺血较敏感的皮层神经元，旨在探讨缺氧条件下Na+，K+-ATP酶是否参与神经元缺氧损伤所致的NMDA受体过度激活。

1 材料与方法

1.1 材料 脑片膜片钳系统系德国HEKA公司产品。出生12～16 d的SD乳大鼠，由河北医科大学动物中心提供。矾酸钠(vanadate)批号:13721-39-6，购自 AlfaAesar公司;双氢哇巴因(Dihydroouabain，DHO)批号:214-663-0，购自 Sigma公司。

人工脑脊液(ACSF)的配制(mmol·L-1):NaCl 125，KCl 3，MgCl21，NaH2PO41.25，D-Glucose 10，NaHCO325，调节渗透压为310 mOsm。使用前以体积分数为95%O2和5%CO2混合气充气饱和1 h，可调节ACSF的pH值在7.4左右。

电极内液(mmol·L-1):KCl 110，NaCl 10，HEPES 10，EGTA 0.2，Na2ATP 5，TEACL 10，用CsOH调节pH值至7.2，渗透压为310 mOsm。

1.2 方法

1.2.1 大鼠皮层脑片的制备 取出生12～16 d的SD乳大鼠，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(0.1 ml/只)，将麻醉好的大鼠断头并迅速切取其前2/3的脑组织，利用震动切片机将脑组织切成厚约300 μm的脑片，即可用于脑片膜片钳记录。

1.2.2 NMDA电流记录 电极由四步玻璃微电极拉制仪(P97，Sutter，美国)拉制而成，拉制好的电极充灌电极内液后电阻为4～8 MΩ。……