李彩丽，魏虎来，苏海翔

砷化合物是一种具有毒性的物质，易与体内含巯基的酶结合而抑制酶活性，可与DNA聚合酶结合，影响DNA合成、修复，诱导染色体畸变和DNA损伤。同时砷也是人体必需的微量元素之一，适量的砷能剌激机体造血和促进细胞生长等［1］，但过量摄入会对人体产生免疫抑制等毒性作用［2］。As2O3作为一种有效的抗肿瘤药物已广泛应用于白血病和实体瘤的治疗中，研究证实［3－4］As2O3可诱导耐药白血病细胞凋亡。我们的前期研究证实［5］As2O3对外周血淋巴细胞具有毒性效应，机制可能与其抑制Bcl-2表达有关。本研究进一步观察As2O3对淋巴细胞的毒性作用以及N-乙酰-L-半胱氨酸(N acetylcysteine，NAC)的拮抗保护效应。

1 材料与方法

1.1 试剂 As2O3为 Sigma公司产品，配成 10 mmol·L－1贮备液;NAC购于上海源聚生物科技有限公司，用生理盐水配成2 mol·L－1的贮存液;淋巴细胞分离液(上海第三生化试剂厂);碘化丙锭(Propidium iodide，PI)、DCF-DA 和 RPMI 1640为 Sigma公司产品;新生小牛血清购自杭州四季青生物工程材料研究所;异硫氰酸荧光素(FITC)标记鼠抗人Bcl-2单抗和鼠IgG1为美国Caltag实验室产品;FITC-Annexin V/PI试剂盒购自Biovision公司。

1.2 方法

1.2.1 外周血淋巴细胞分离 抽取健康人外周血10 ml，肝素抗凝。加入等量淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypague，d=1.077g·ml－1)，室温、1 500 r·min－1离心30 min，吸取中间界面层淋巴细胞。用RPMI 1640洗涤2次，用1%台盼蓝染色计数活细胞数应大于95%。

1.2.2 人外周血淋巴细胞体外培养 正常人外周血淋巴细胞用含15%新生牛血清、1×105U·L－1青霉素和链霉素的RPMI 1640稀释成3×108·L－1后接种于96孔细胞培养板(Costar公司)中，分别加入1 ～50 μmol·L－1As2O3、2 mmol·L－1NAC 和1 ～50 μmol·L－1As2O3+2 mmol·L－1NAC，置 37℃、5%CO2培养箱中培养24、48和72 h，台盼蓝染色计数活细胞数，计算细胞增殖抑制率和半数抑制浓度(IC50)。……