闫凤霞，高维娟，钱 涛，叶冬青，任立群，张雅丽，侯志平

脑血管病是临床常见病、多发病，是目前三大致死疾病之一是首位致残因素，且其发病率、病死率及致残率有逐年上升的趋势，其中缺血性脑血管病占绝大部分。黄芪是中医药治疗缺血性脑血管病的常用药物，具有清除自由基、减轻脑水肿、对抗炎症介质、缓解钙离子超载、改善神经元能量代谢、降低兴奋性氨基酸毒性等作用［1］。本课题组前期试验证实，黄芪注射液可减轻全脑缺血/再灌注损伤引起的大鼠海马神经元的凋亡，并可降低离体培养的大鼠海马神经元缺氧缺糖/复氧复糖后所致的凋亡［2］，抑制凋亡相关基因JNK3［3］，通过抑制JNK3信号通路而减少caspase-3的表达［4］。本研究通过对原代培养的大鼠海马神经元施加缺氧缺糖/复氧复糖因素，模拟脑缺血/再灌注损伤过程，观察黄芪注射液对缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific protease，caspase-3)表达的影响，探讨黄芪注射液抑制缺氧缺糖/复氧复糖大鼠海马神经元凋亡的分子机制。

1 材料

1.1 实验材料 SD大鼠，新生24 h之内，♀♂兼有，2级动物，由河北省实验动物中心提供，合格证号:冀医动字第702003号。

1.2 试剂和仪器 兔抗caspase-3多克隆抗体、caspase-3蛋白免疫组化SP试剂盒、Western blot试剂盒购于北京中杉金桥公司;caspase-3 mRNA探针及原位杂交试剂盒均购自天津灏洋生物科技有限公司;BCA蛋白定量试剂盒购于上海申能博彩生物公司;DNaseⅠ、多聚赖氨酸、阿糖胞苷购自美国Sigma公司;胎牛血清、马血清由Hyclone公司生产;谷氨酰胺、胰蛋白酶购自华美生物工程公司;DMEM/F12培养基、B27由美国Gibco公司生产;黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产;其他试剂为国产分析纯。……