陈少雅，陈崇宏，杨丽娟，林 菁

褪黑素(melatonin，MT)是生物体内普遍存在的一种吲哚类激素，在人体内主要由松果体合成和分泌。大量研究表明，MT具有镇痛、镇静、调整时差、抗氧化、免疫增强、抗肿瘤［1］等作用，且相对安全。在抗肿瘤及肿瘤辅助治疗方面存在理论价值和应用前景。目前，中、晚期宫颈癌位居十大高死亡率恶性肿瘤之列。宫颈癌术后必须进行化疗，有临床研究表明［2］宫颈癌患者血浆中MT水平较正常人低，故MT用于宫颈癌治疗具备可能性。然而，国外已有的MT对HeLa细胞抑制作用的研究结果存在争议［3］。MT抗肿瘤的机制目前仍不清楚。NF-κB在HeLa细胞中高表达，对肿瘤的发生、发展发挥重要作用，是肿瘤预防和治疗的潜在靶点［4］。因此，本研究旨在对MT抗HeLa细胞增殖活性作进一步探讨，并探究其与NF-κB蛋白表达的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株 人宫颈癌HeLa细胞购于上海中国科学院细胞库。

1.1.2 药品及试剂 MT，Sigma公司产品;RPMI 1640培养基干粉，Hyclone产品;胰蛋白酶为Difco进口分装;小牛血清，杭州四季青生物试剂公司产品;碘化丙啶(PI)，吖啶橙(AO)，溴化乙锭(EB)，四甲基偶氮唑盐(MTT)为Sigma公司产品;其余试剂均为分析纯产品;anti-NF-κB小鼠单抗;anti-β-actin山羊单抗;辣根酶标记兔抗山羊IgG、碱磷酶标记马抗小鼠IgG、碱磷酶标记山羊抗兔IgG，均为Santa Cruz产品;碱性磷酸酶(AP)显色底物为进口分装。

1.2 方法

1.2.1 MTT法检测细胞体外增殖抑制试验 取对数生长期的HeLa细胞，以0.25%胰蛋白酶充分消化后，以培养基配成适当浓度接种于96孔培养板中，180 μl/孔，实验组加入等体积不同浓度的药物20 μl/孔(终浓度分别为 0.008、0.04、0.2 及 1 g·L-1)，对照组加入等体积培养液。……