张春江 杨平荣 王 槐 丁佳栋 (兰州大学生命科学学院,兰州 730000)

细胞因子介导的自身免疫是引起自身免疫性疾病的一种重要的机制。白介素17(IL-17)是目前新发现的细胞因子,IL-17与自身免疫病和炎症性疾病关系密切。衔接蛋白ACT1是活化核转录因子NF-κB的重要蛋白分子。ACT1在IL-17信号通路中起重要作用,是IL-17和其受体IL-17R以及下游信号传导之间重要的信号连接分子[1,2]。ACT1经SEFIR结构域与IL-17受体结合,活化TRAF6、TRAF3、TAK1分子,继而激活转录因子NF-κB,表达相关细胞因子,从而导致自身免疫疾病和炎症的发生[3,4]。ACT1介导的IL-17信号通路诱导类风湿关节炎、哮喘、自身免疫性脑脊髓炎、肠炎等自身免疫性疾病的发生[5-7]。以ACT1与IL-17受体相互作用为原理,阻断其相互作用为靶点,应用酶互补荧光检测技术,建立以β-内酰胺酶报告基因酶互补检测系统细胞水平的高通量筛选系统,筛选针对药物靶标的抑制剂,从而为治疗自身免疫学疾病新药的研制和开发奠定基础。

本论文以衔接蛋白ACT1与白介素17(IL-17)受体相互作用为原理,阻断其相互作用为靶点,克隆构建ACT1-Bla-A、IL-17R-Bla-B融合基因,融合基因分别在真核细胞系 HEK293中瞬时高效表达,采用荧光显微镜,检测 β-内酰胺酶(β-Lactamase)荧光报告系统的酶互补作用。进一步利用对抗性基因的筛选,筛选在Hela细胞系中融合基因共表达的稳定真核细胞表达系统,获得细胞水平的以β-内酰胺酶为检测系统的高通量筛选系统。从细胞表达水平高通量筛选有效抑制ACT1与其特异性受体IL-17R相互作用的抑制剂,从而为治疗自身免疫学疾病新药的研制和开发奠定基础。……