向邦德 刘 星 蒋文超 赵荫农 黎乐群 (广西医科大学附属肿瘤医院肝胆外科,南宁530021)

消融治疗已成为肝癌治疗的有效手段。消融治疗不但能直接杀死肿瘤细胞,其热效应也能促使肿瘤抗原的暴露和释放,在一定程度上诱导宿主主动免疫效应[1],但因为这种效应微弱,并不能产生具有实际意义的免疫治疗效果,所以肿瘤高复发趋势是肝癌消融治疗面临的最大难题之一。含胞嘧啶-磷酸盐-鸟嘌呤基序的寡脱氧核苷酸(Cytidine-phosphatte-guanine oligodeoxynucleotides,CpG ODN)是一类以非甲基化CpG为核心的寡聚脱氧核苷酸序列,作为一种免疫佐剂能激活各种免疫细胞[2]。本研究旨在探讨消融灶周围注射CpG ODN诱导抗肿瘤反应的效能,为消融联合免疫治疗防治肝癌复发提供实验室依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及细胞株 雌性C57BL/6J小鼠,4～6周龄,购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司,饲养于广西医科大学动物实验中心。Hepa 1-6小鼠肝癌细胞株,购自中国科学院上海生科院细胞资源中心。来源于C57BL/6J的B16黑色素瘤细胞株购于中山大学中山医学院动物实验中心。

1.2 主要设备 FORSEAMTC-3微波消融治疗仪(南京庆海微波电子研究所),频率2 450 MHz,功率输出范围5～120 W,18 G电极针,微波辐射芯线长0.3 mm。数字化温度控制器(日本PKC器械公司),20 G测温针,分辨率0.5℃。

1.3 主要试剂 LDH试剂盒购于美国Promega公司,CpGODN1826 序 列 为 5′-TCCATGACGTTCCTGACGTT-3′,由上海生工生物工程有限公司合成,以无菌生理盐水配成1 g/L溶液,-20℃条件下保存。IL-12和IL-10 ELISA检测试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。CD8、CD4兔抗鼠单克隆抗体购自福州迈新生物有限责任公司。……