肝苏胶囊的提取工艺比较研究

2011-10-31红魏双元税丕先

中国医药指南 2011年34期

关键词：槲皮素药材胶囊

罗红魏双元税丕先

（1 荣县中医院，四川荣县 646000；2 绵阳市中医院，四川绵阳 646000；3 泸州医学院，四川泸州 646000）

肝苏胶囊的提取工艺比较研究

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（1 荣县中医院，四川荣县 646000；2 绵阳市中医院，四川绵阳 646000；3 泸州医学院，四川泸州 646000）

目的探讨肝苏胶囊的提取工艺。方法利用不同的煎煮时间、不同的加水倍数及不同的煎煮次数进行考察，优化提取工艺；用Diamonds C18柱（250 mm×4.6mm，5μm），测定波长370nm，流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（45∶55），采用HPLC法，以槲皮素为其含量测量指标筛选出最佳提取工艺。结果采用第一次加入药材量12倍量的水煎煮2h，第二次加入药材量8倍量的水煎煮1h的提取工艺，样品中槲皮素含量较高，且提取工艺较优化。结论该制剂采用煎煮两次，第一次加入药材量12倍量的水煎煮2h，第二次加入药材量8倍量的水煎煮1h的提取工艺，最经济实用。

肝苏颗粒；提取；槲皮素；高效液相色谱

肝苏胶囊收载于《国家药品监督管理局标准》（标准编号：YBZ08462005），由扯根菜（Penthorum Chinese Pursh）单味中药经提炼加工而成，具有降酶，保肝，退黄，健脾之功效，适用于慢性活动性肝炎、乙型肝炎，也可用于治疗急性病毒性肝炎[1]。肝苏胶囊原提取工艺是将单味药扯根菜切碎，煎煮三次，每次加药材量10倍的水，煎煮2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成相对密度1.13～1.15（80～90℃）的清膏。此提取工艺总的加水量过大，使浓缩时间增长，而煎煮时间和煎煮次数也不科学，原提取工艺不仅浪费人力资源、能量和水资源，还增长了生产周期。因此应不断优化原提取工艺。本研究以该制剂标准要求之槲皮素为含量测定指标，确定最佳提取工艺。

1 材料与仪器

1.1 实验材料

1.1.1 实验药材

扯根菜，经泸州医学院生药教研室税丕先教授鉴定为虎耳草科植物扯根菜Penthorum Chinese Pursh.的干燥地上部分。

1.1.2 实验试药

槲皮素对照品（经五氧化二磷干燥，中国药品生物制品检定所，批号100081-200406）；甲醇（分析纯和色谱纯）；盐酸；磷酸溶液；水为重蒸馏水。

1.2 实验仪器

高效液相色谱仪（美国戴安公司，U3000）；色谱工作站（美国戴安公司，U3000）；Diamonds C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；电子天平；液体比重天平（PZ-B-5）；圆底烧瓶；回流管；烧杯等。

2 方法与结果

2.1 扯根菜的提取

用天平称取100g扯根菜，切碎，置于盆中；按表1设定条件提取，将煎液加热浓缩至相对密度约为1.15～1.18（60～65℃）的清膏。

2.2 槲皮素的含量测定

2.2.1 样品液的制备

用40mL 2.3%的盐酸甲醇溶液将清膏回流提取一个小时，冷却后过滤于50mL的容量瓶中，再加甲醇稀释至刻度线，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过后作为样品溶液。

2.2.2 色谱条件

表1 扯根菜提取工艺表

色谱柱为Diamonds C18（250mm×4.6mm，5μm）；测波长：370nm；体积流量：1mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；流动相为甲醇-0.2%磷酸溶液（44∶55）；理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于3000。

2.2.3 标准品的配置

用分析天平精密称取于五氧化二磷真空干燥24h至恒重的对照品槲皮素10mg于50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成槲皮素浓度为0.2mg/mL的标准品溶液。

2.2.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液（0.2mg/mL）0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5mL分别置于2mL容量瓶中，加甲醇稀释到刻度线；各经0.45μm微孔滤膜滤过后，用上述色谱条件，测定峰面积，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）回归，得回归方程：Y=74.8758X+0.0434，r=0.9997，槲皮素在0.4～1.5μg范围内有较好的线性关系。

2.2.5 精密度试验

将6号样品溶液连续进样6次，按上述色谱条件测定，计算槲皮素峰面积的相对标准偏差RSD=1.3199%，表明仪器和色谱条件均具有良好的精密性。

2.2.6 稳定性试验

取6号样品溶液，在0～12h内，每2h进样1次，按上述色谱条件测定，计算槲皮素峰面积的RSD=1.4584%，表面样品溶液在12h内稳定。

2.2.7 重现性试验

取同一批扯根菜6份，每份100g，按照6号样品的提取方法提取，并按2.2.1的方法配置成样品溶液，经0.45μm微孔滤膜滤过后，用上述色谱条件进行测定，计算含量分别为0.1371 mg/mL，0.1362mg/mL，0.1348mg/mL，0.1330mg/mL，0.1312mg/mL，0.1299 mg/mL，则RSD=2.1208%（n=6），表明本法重现性良好。

2.2.8 回收率试验

分别取2.2.7中样品各1mL，以两个样品溶液为一组，分别加入槲皮素标准品粉末0.11mg、0.13mg、0.15mg，混匀。依照上述色谱条件测定，计算得槲皮素的回收率如表2。

表2 加样回收率试验测定结果

2.2.9 样品测定

分别将1～11号样品进样进行含量测定，并将数据填入表3。

表3 槲皮素含量测定表

3 讨论

3.1 肝苏胶囊处方中扯根菜为苗族民间的草药，又称赶黄草，具有清热解毒、退黄利湿、活血散瘀、利水消肿之功效，广泛用于治疗各型肝炎、胆囊炎、脂肪肝等[2,3]。经数年来临床疗效观察，已证实有显著的治疗作用，可继续深化对其提取制备工艺的研究，在能够充分提取扯根菜有效成分的基础上简化工艺流程，实现其符合大生产的要求。

3.2 关于指标成分的选定

扯根菜中含有黄酮类、有机酸类等成分，其中已知并且稳定存在的为没食子酸、槲皮素[4]，另外还有槲皮苷（槲皮素-3-O-鼠李糖苷）、乔松素-7-O-葡萄糖苷等其他黄酮成分[5]。槲皮素是肝苏胶囊的主要成分，也是有效成分[6]，肝苏胶囊标准中以其为含量测定指标。已有文献报道采用HPLC法测定扯根菜中槲皮素，测定方法准确，重复性好，安全稳定，不需要复杂的仪器设备，可用于扯根菜煎液中槲皮素的含量测定[7,8]，以确定其最佳的提取工艺。

3.3 加水量的确定

在实验探讨阶段，100g扯根菜第一次煎煮加入600mL（药材量6倍量）的水，干燥药材本身要吸收一部分，剩下的水煎煮不到一小时就会煎干，因此排除了加600mL（药材量6倍量）水的煎煮方案；100g扯根菜第一次煎煮加入800mL（药材量8倍量）或者900mL（药材量9倍量）的水，煎煮一个小时，在煎煮过程中需要非常小心，火候没有控制好，就会煎干，且最后剩下的煎液很少，因此第一次煎煮加800mL（药材量8倍量）或者900mL（药材量9倍量）的水不实用；而照原工艺，第一次煎煮加入1000mL（药材量10倍量）的水，煎煮2h也必须严格控制好火候，最后剩下的煎液很少，此方案用于工业大生产不实际；经过多次实验探究，第一次煎煮加入1200mL（药材量12倍量）的水，第二次、三次加800mL（药材量8倍量）或者900mL（药材量9倍量）的水，这样的方案煎煮实用且最后剩下的煎液量适中。

3.4 数据分析

经过实验，从表二可以看出5号样品中槲皮素的含量最低，原提取工艺第11号样品中槲皮素含量居中，8号样品中槲皮素含量最高，6号样品次之；各样品中槲皮素的含量按8、6、2、1、3、11、9、10、4、7、5的标号，依次减少。8号样品的提取工艺是煎煮3次，第一次加1200mL（药材量12倍量）的水，煎煮2h，第二次加入800mL（药材量8倍量）的水，煎煮1h，第三次加入800mL（药材量8倍量）的水，煎煮1h；6号样品的提取工艺是煎煮2次，第一次加1200mL（药材量12倍量）的水，煎煮2h，第二次加入800mL（药材量8倍量）的水，煎煮1h；相比较，6号样品的提取工艺更简单，消耗的能源更少；而8号样品中槲皮素的含量仅比6号样品中槲皮素的含量仅多0.0004 mg/mL，结合提取工艺，采用6号样品的提取工艺更优化。