汤 諹, 李树清, 李 凡, 李 飞, 张 颖

(1昆明医学院第一附属医院皮肤/医学美容科，云南 昆明 650032；2昆明医学院基础医学院病理生理教研室，云南 昆明 650031)

缺血后适应对树鼩海马CA1区神经元Akt信号转导调控的机制研究*

汤 諹1, 李树清2△, 李 凡2, 李 飞2, 张 颖2

(1昆明医学院第一附属医院皮肤/医学美容科，云南 昆明 650032；2昆明医学院基础医学院病理生理教研室，云南 昆明 650031)

目的了解缺血后适应(PC)对树鼩脑缺血时海马CA1区神经元磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)下游底物丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt Ser-473/Thr-308)磷酸化(Akt[pS473]/Akt[pT308])的调控，探讨Akt信号转导通路在缺血PC脑保护中的作用机制。方法以树鼩为实验动物，用光化学诱导法复制局部脑缺血，并于脑缺血后3 h 30 min反复夹闭缺血侧颈总动脉3个循环(5 min 1个循环)以制备后适应模型。在光镜、电镜下观察海马CA1区神经元损伤及其超微结构变化的同时，采用免疫组化法了解脑缺血树鼩海马CA1区神经元Akt[pS473]/Akt[pT308]的分布及定位，并以灰度值检测磷酸化强度。结果脑缺血可导致树鼩海马损伤及细胞超微结构的明显异常；而缺血PC可使海马CA1区神经元超微结构的异常明显改善。免疫组化结果显示，对照组海马CA1区Akt[pS473]及 Akt [pT308]的磷酸化为阴性。缺血PC组与缺血组在不同时点的胞浆、胞膜均出现Akt[pS473]，但缺血72h Akt[pS473]减弱(灰度值146.6±2.9)。缺血组Akt [pT308]仅在4 h明显增强(灰度值135.5±2.2)，随后则未检测到(灰度值分别为165.3±3.7，163.3±2.5)。而缺血PC组4 h时点Akt [pT308]呈阴性，随后24 h、72 h则持续显著的阳性。结论缺血PC能明显减轻海马CA1区神经元的缺血性损伤，其保护机制可能与 Akt Ser-473和Thr-308 2个位点磷酸化导致PI-3K/Akt信号转导途径的激活有关。……