廖百花, 冯亦军, 曾禄贤， 肖小敏

(1 广东省第二人民医院妇科， 广东 广州 510317；2暨南大学第一临床学院妇产科， 广东 广州510633)

固相转染HPV16-siRNA对荷宫颈癌细胞SiHa小鼠瘤体体积及P53、P16表达的影响*

廖百花1, 冯亦军1, 曾禄贤1， 肖小敏2△

(1广东省第二人民医院妇科， 广东 广州 510317；2暨南大学第一临床学院妇产科， 广东 广州510633)

目的观察靶向基因治疗后不同时点荷宫颈癌细胞小鼠HPV16-DNA、瘤体体积、P53及P16蛋白的变化，探讨在体固相转染HPV16-siRNA的有效性。方法采用 SiHa细胞皮下注射建立荷宫颈癌细胞SCID小鼠模型。制备HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶。将40只荷宫颈癌细胞SCID小鼠随机分为对照组8只和研究组32只和研究组使用HPV16靶向siRNA-Lipo2000-卡波姆凝胶进行基因治疗，对照组仅使用Lipo2000-卡波姆凝胶处理；分别于治疗后4 d、8 d、12 d、16 d处死小鼠，每个时点研究组处死8只、对照组处死2只。PCR检测两组小鼠瘤体中HPV16-DNA滴度，测各时点的瘤体体积，常规病理切片检测肿瘤细胞形态，免疫组化检测P16及P53的表达。结果(1)研究组治疗后8 d及12 d时点瘤体内HPV16-DNA明显降低，与对照组之间的差异显著(P<0.05)，4 d及16 d 2个时点与对照组之间的差异不显著(P>0.05)；(2)治疗后12 d瘤体平均体积明显缩小，与对照组之间的差异显著(P<0.05)；(3)转染后12 d肿瘤细胞核异质性较对照组减轻，核浆比例减小；(4)P16的表达强度在各时点研究组与对照组之间的差异不显著(P>0.05)；治疗后8 d及12 d研究组P53 的表达强度明显降低，与对照组之间的差异显著(P<0.05)。结论SCID小鼠所荷宫颈癌细胞瘤体经靶向转染HPV16-siRNA后8 d及12 d时点瘤体内HPV16-DNA和P53均较对照组明显下降，12 d瘤体体积较对照组明显下降；在体固相转染siRNA可以在一定时段内有效抑制HPV-DNA的复制及肿瘤的生长速度。

宫颈肿瘤； RNA干扰； 人乳头状瘤病毒； P53蛋白; P16蛋白

人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染与宫颈癌关系密切，但无有效临床治疗方法；近年来的研究发现，RNA干扰(RNA interference，RNAi)能有效抑制HPV复制[1-3]，为宫颈持续性HPV感染的治疗提供了新的策略及理论依据。但目前众多的研究均是在液相条件下对离体细胞进行转染实验，在体细胞进行固相siRNA转染的研究目前鲜见报道。……