张 帅， 李有杰, 张 超， 岳 真, 张文娟， 刘在贵， 谢书阳△

(1滨州医学院生物化学教研室，医学分子遗传学研究所，2烟台山医院，山东 烟台 264003)

miRNA在去甲斑蝥素致K562细胞凋亡中的作用研究*

张 帅1， 李有杰1, 张 超1， 岳 真1, 张文娟2， 刘在贵1， 谢书阳1△

(1滨州医学院生物化学教研室，医学分子遗传学研究所，2烟台山医院，山东 烟台 264003)

目的探讨miRNA在抗肿瘤药物去甲斑蝥素(DMC)诱导K562细胞凋亡过程中的作用。方法DMC诱导细胞凋亡后，通过基因芯片技术分析miRNA表达改变，进一步用RT-PCR和定量PCR验证部分miRNA的表达变化；并应用基因信息软件分析miRNA相关的基因，ELISA验证相关基因表达情况。结果DMC致凋亡组，基因芯片技术检测到290多种miRNA的表达发生明显改变，用RT-PCR和定量PCR分析结果示：在DMC处理组，miR-16、miR-34a和miR-125等表达增高1.5倍以上，而miR-106和miR-150的表达降低60%以上。通过microRNA TargetScan和miRanda软件分析发现癌基因(bcl-2、E2F1、E2F3)和抑癌基因(RB1、p53)表达可能受上述miRNA表达的调控。 ELISA结果示：在DMC组，RB1和P53蛋白表达显著增高，而Bcl-2、E2F1 和E2F3蛋白的表达显著降低。结论DMC能诱导K562细胞发生凋亡，并能引起细胞内miRNA及相关基因的表达发生改变。

去甲斑蝥素； 细胞凋亡； 微小RNA； 基因表达

去甲斑蝥素(demethylcantharidin，DMC)是我国研制合成的斑蝥素衍生物，与斑蝥素相比，少了第2、3位甲基，其毒副作用明显降低，对肺癌、肝癌、结肠癌[1]和乳腺癌[2]等多种肿瘤有明显抑制作用，可选择性地抑制肿瘤细胞生长，并具有抑制肿瘤转移的活性。Kok等[3]报道DMC可以通过减少G1期细胞数目、降低caspase-3的活性，抑制急性髓细胞性白血病(acute myelocytic leukemia，AML)和慢性髓细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)细胞的增殖。最近研究报道DMC毒性小，可通过抑制肝性白血病因子(hepatic leukemia factor，HLF)诱导AML细胞的凋亡。……