徐同鹏, 刘立根,2△, 蒋雪玮, 高 武, 谢英华, 赵莉敏, 韩曦瑶, 陆道培,2

(1复旦大学附属上海市第五人民医院血液科，复旦大学血液病研究中心,上海 200240； 2上海道培医院, 上海 200240)

白花丹醌增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡及其机制*

徐同鹏1, 刘立根1,2△, 蒋雪玮1, 高 武1, 谢英华1, 赵莉敏1, 韩曦瑶1, 陆道培1,2

(1复旦大学附属上海市第五人民医院血液科，复旦大学血液病研究中心,上海 200240；2上海道培医院, 上海 200240)

目的观察白花丹醌、rsTRAIL单独及其联合体外诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用，探讨其作用机制。方法采用WST-8 (CCK-8)比色法测定rsTRAIL、白花丹醌单独和联合应用对Kasumi-1细胞的生长抑制率；用流式细胞术、TUNEL法观察并且检测凋亡率；实时定量PCR检测白花丹醌作用后DR4和DR5 mRNA水平变化；Western blotting法检测单独应用及联合应用后DR5、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bid、Bax及c-FLIP的变化。结果(1)白花丹醌和rsTRAIL单独应用均可抑制Kasumi-1细胞的生长，联合应用可增加对Kasumi-1细胞的生长抑制率且呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。(2)rsTRAIL(100 μg/L)和白花丹醌(2 μmol/L)单用及其联合使用诱导Kasumi-1细胞Annexin V阳性细胞百分率分别为(27.7±2.9)%、(25.6±3.1)%和(52.1±3.3)%。(3)TUNEL法检测发现联合应用组较单用组凋亡细胞显著增多。(4)实时定量PCR检测发现白花丹醌可以上调DR5的表达。(5)Western blotting发现白花丹醌单独作用及其联合rsTRAIL应用时上调DR5、激活caspase-8和下调c-FLIP表达。结论白花丹醌具有增强TRAIL诱导Kasumi-1细胞凋亡的作用，其机制与DR5上调、caspase-8激活和c-FLIP下调有关。

Kasumi-1细胞； 细胞凋亡； 白花丹醌； 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体; 基因,DR5; 基因,DR4

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand，TRAIL)是TNF超家族成员之一，是一种Ⅱ型膜蛋白，通过与其特异性死亡受体(DR4和DR5)结合而激活凋亡信号转导途径，从而诱导肿瘤细胞凋亡[1]。白花丹醌是中药白花丹的主要活性成分，具有广泛的药理活性，包括抗菌消炎、抗生殖、抗凝等作用[2,3]。研究发现，白花丹醌也具有明显的抗肿瘤作用，能够抑制K562、Raji、Jurkat、NB4等白血病细胞系以及宫颈癌和肝癌等实体瘤细胞系的生长和增殖[3-5]。Kasumi-1是培养自人t(8;21)急性髓系白血病患者的细胞系，为体外研究该类型白血病的良好模型。……