李春香， 李福海， 夏 伟△， 时 庆， 汪大琨

(山东大学齐鲁医院1儿科，2低温医学研究室，山东 济南250012)

大鼠肺动脉平滑肌细胞Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及机制*

李春香1， 李福海1， 夏 伟1△， 时 庆2， 汪大琨2

(山东大学齐鲁医院1儿科，2低温医学研究室，山东 济南250012)

目的研究Rho激酶对p-Smad1核迁移的作用及信号转导途径，探讨它们在肺血管重构中的作用机制。方法分离培养大鼠远端肺动脉平滑肌细胞，应用血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)启动肺动脉平滑肌细胞Rho激酶信号通路，应用骨形态发生蛋白2(BMP-2)启动BMP信号通路，并用Rho激酶抑制剂Y-27632、MEK抑制剂U0126进行干预。培养细胞分成5组：(1)对照组；(2)BMP-2组；(3)BMP-2+PDGF-BB组；(4)BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组；(5)BMP-2+PDGF-BB+U0126组。免疫荧光染色标记p-Smad1在细胞核内外的分布并计算p-Smad1核迁移阳性细胞百分数(即核迁移率)。分离平滑肌细胞核蛋白和胞浆蛋白，Western blotting分析p-Smad1在细胞内的总量和细胞核内外相对含量的变化。Kit-WST-8试剂盒检测细胞增殖。结果BMP-2组p-Smad1在细胞内的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率明显高于对照组(P<0.05)；BMP-2+PDGF-BB 组p-Smad1的核迁移率和在细胞核中的相对含量明显低于BMP-2组(P<0.05)，但是细胞内p-Smad1总量无明显改变(P>0.05)；BMP-2+PDGF-BB+ Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组细胞内p-Smad1的总量、在细胞核中的相对含量和核迁移率与BMP-2组基本相似(P>0.05)。BMP-2组的A值明显小于对照组(P<0.05)；PDGF-BB+BMP-2组的A值明显大于BMP-2组(P<0.05)且大于对照组(P<0.05)；BMP-2+PDGF-BB+Y-27632组和BMP-2+PDGF-BB+U0126组的A值均小于PDGF-BB+BMP-2组(P<0.05)。结论在大鼠肺动脉平滑肌细胞，PDGF-BB激活的Rho激酶通过MEK/ERK1/2抑制BMP-2引起的p-Smad1核迁移，促进平滑肌细胞增殖。

肺动脉; 平滑肌细胞；Rho激酶；骨形态发生蛋白质2；p-Smad1核迁移

肺动脉高压(pulmonary artery hypertension,PAH) 的发生，先是肺微小动脉平滑肌细胞增生及表型的转变，导致血管壁增厚、内径狭小、张力增高[1]，而后不但引起肺血管收缩性改变，而且导致肺小动脉结构重构。文献资料表明Rho激酶信号通路和骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)信号通路在PAH肺血管结构重构过程中发挥了相反的调节作用。促……