马学华,张 萱,张 娜,赵 宇,宋丽婷

(哈尔滨医科大学附属第一医院检验科,黑龙江哈尔滨150001)

强直性脊柱炎(AS)是一种慢性自身免疫性疾病,主要累及髂骶关节、脊柱、骨软骨组织及四肢关节,表现为脊柱和髂骶关节疼痛、活动障碍、畸形、关节强直而丧失劳动力。有学者研究表明外周血淋巴细胞比例失调见于系统性红斑狼疮、多发性硬化症、原发性血小板减少性紫癜等自身免疫性疾病患者[1-3],并与疾病的发生密切相关,但淋巴细胞亚群与AS关系的报道却不多见。本研究应用流式细胞术对AS患者外周血中淋巴细胞亚群进行检测分析,以探讨淋巴细胞与强直性脊柱炎发病的关系。

1 材料与方法

1.1 检测对象 2008年12月至2009年7月来我院就诊的AS患者,参照1984年修订的AS 36例诊断标准[1],符合以下3项标准:(1)腰痛持续3个月以上,活动后减轻,休息后无缓解;(2)腰椎额状面和矢状面活动受限;(3)腰廓活动度低于相应年龄、性别的正常人(＜2.5 cm);放射学标准髂关节炎为双侧≥Ⅱ级或单侧Ⅲ-Ⅳ级或仅符合放射学标准。男25例,女11例,年龄15-32岁,平均年龄23.1±4.8岁。对照组32名,男性20例,女性 12例,平均年龄25.8±3.6岁,无自身免疫性疾病及骨关节病。

1.2 主要试剂及仪器 试剂美国BD公司生产的SimulSET IMK Plus试剂盒。其中包括CD45-FITC/CD14-PE,IgG1-FITC/IgG2a-PE,CD4-FITC/CD8-PE,CD3-FITC/CD19-PE,CD3-FITC/CD16+56-PE,CD3-FITC/HLA-DR-PE 6只荧光抗体;BD FACS红细胞裂解液。用美国BD公司生产的FACSCalibur流式细胞仪检测。

1.3 方法 抽取待检患者清晨空腹静脉血2 ml,EDTA-K2抗凝。6个试管中分别加入上述6种荧光标记抗体 20 μ l,每管 100 μ l全血 ,混匀 ,室温避光静置20分钟,每管加入2 ml红细胞裂解液,混匀后室温避光反应10分钟,1 000 r/min离心10分钟,弃上清,每管加2 ml PBS洗涤,以300 μ l PBS悬浮细胞。……