牛 辉,苑克伟,史美龙,陈治龙*

(1.北华大学附属医院普外科,吉林吉林132011;2.吉林省人民医院普外科)

血管紧张素转移酶(Angiotensin I-converting enzyme,ACE),又称CD143,是肾素血管紧张素系统的关键酶,广泛表达于多种器官和组织。参与肿瘤血管生成、细胞生长、迁移和转移[1]。ACE蛋白和mRNA在多种肿瘤中均有差异性表达[2]。体内外实验及流行病学研究均显示使用ACE抑制剂能够减缓肿瘤生长和血管生成[3]。由此认为,ACE抑制剂有望成为新的抗肿瘤药物,用于肿瘤的防治中。然而,ACE mRNA与结直肠癌临床特征的关系未见文献报道,本研究采用实时荧光定量PCR检测ACE mRNA在结直肠癌中的表达,初步探讨其与结直肠癌的发生、发展、浸润转移的关系以及临床应用的意义。

1 材料与方法

1.1 研究对象

结直肠癌癌组织及癌旁组织各31例,均来自北华大学附属医院手术切除标本,手术切除组织立即液氮冻存,肿瘤组织均经病理检查证实,为结直肠癌。其中男性15例,女性16例,平均年龄55.6(±13.4)岁。癌旁组织取自距结直肠癌病变边缘2.0 cm的组织。

1.2 仪器与试剂

TRIpure Reagent购自北京百泰克公司,逆转录试剂盒和SYBRGreen II实时荧光定量PCR试剂盒均购自Fermentas公司。参照文献[2]设计ACE引物[2]:上 游:5′-CTCAAGTACTTCCAGCCAGTC-3′;下游 :5′-GCAGAATCTTGCTGGTCT CTG-3′。内参 GAPDH:上游引物 :5′-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC-3′;下 游 引 物 :5′-GAAGATGGTGATGGGATTTC-3′,引物由上海英俊生物有限公司合成。ABI7500荧光定量PCR仪为美国ABI公司产品。

1.3 总RNA抽提及反转录

取液氮冻存组织约60 mg,加入TRIpure 1 ml,匀浆,加入0.2 ml氯仿,离心后吸取上清,加入0.5 ml异丙醇,离心沉淀后弃上清,75%乙醇沉淀,无RNA酶水溶解RNA。取 1 μ l用NANODROP 1000超微量紫外分光光度计进行RNA定量检测,分装后-80℃保存备用。反转录操作按照试剂盒(Fermentas公司)操作说明书进行,所得cDNA-20℃保存。……