张 晓 君, 孙 庆 元, 王 建 军

( 大连工业大学 生物工程学院, 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

虫草菌[Cordycepssinensis(Berkey) Sacc.]隶属于真菌界(Fungi)、子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌纲(Ascomycetes)、粪壳菌亚纲(Sordariomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)、虫草属(Cordyceps)[1-3]。一般虫草菌侵染寄主后,菌丝体分化形成垫状结构即子座。子座膨大并产生子实体,即子囊壳,成熟的子囊壳中产生子囊和子囊孢子。在野外虫草菌孢子在夏季萌发侵染土壤中的蝙蝠蛾幼虫后,形成的子座在次年5月份长出地面[4],貌似草,这种蝙蝠蛾幼虫与虫草菌的复合体称为冬虫夏草。冬虫夏草主要分布于我国的青藏高原海拔3 500～5 000 m的高山草甸或高山灌丛草甸,在四川、云南和甘肃也有少量分布[5]。作者从野外采集的冬虫夏草中分离无性型虫草菌株,对菌虫体组织和子座组织萌发、无性型虫草菌株菌落形态及显微结构进行了观察,同时对无性型虫草菌株发酵培养基组成成分进行了优化,以期为人工培育冬虫夏草以及无性型虫草菌株发酵提供理论基础。

1 实验材料

1.1 冬虫夏草

新鲜冬虫夏草,采自四川省阿坝藏族羌族自治州黑水县,冰箱中4 ℃保存。

1.2 培养基

分离培养基(PDA培养基):马铃薯20%,葡萄糖2%,VB10.01%,KH2PO40.1%,MgSO40.1%,琼脂2%,pH 6.0。用于无性型虫草菌株的分离。

斜面培养基(1%牛肉粉PDA培养基):马铃薯20%,葡萄糖2%,牛肉粉1%,VB10.01%,KH2PO40.1%,MgSO40.1%,琼脂2%,pH 6.0。用于无性型虫草菌株的保藏。

基础培养基:葡萄糖3%,牛肉粉2%,KH2PO40.1%,MgSO40.1%,VB10.01%,pH 6.0。用于无性型虫草菌株的发酵。

2 实验方法

2.1 分 离

用水清洗冬虫夏草表面的杂质,在无菌条件下分别用0.1%氯化汞、75%酒精对冬虫夏草进行表面消毒,无菌水冲洗多次[6],以头部为界将其剪开,生长子座的头部称为子座组织,头部以外的称为菌虫体组织。……