韩 飞,杨致邦

(1.重庆三峡中心医院微生物免疫科,万州404000;2.重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室 400016)

幽门螺杆菌重组1188蛋白的表达＊

韩 飞1,杨致邦2

(1.重庆三峡中心医院微生物免疫科,万州404000;2.重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室 400016)

目的表达幽门螺杆菌(H.pylori)重组1188蛋白,为研究幽门螺杆菌的黏附机制奠定基础。方法用聚合酶链反应(PCR)技术从H.pylori标准株NCTC 11637的基因组DNA中扩增hp1188基因片段,插入原核表达载体pQE-30,构建重组载体pQE30-hp1188,经DNA测序分析确认后,转化大肠杆菌DH5α,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。Ni2+-N TA树脂纯化表达蛋白,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析表达形式和表达量。结果重组表达质粒pQE30-hp1188构建成功,所得序列完整,插入的基因片段全长810 bp,与基因文库中的hp1188基因同源性达98%。SDS-PAGE显示表达产物相对分子质量约为30.6 kD,与预期一致,蛋白表达量占全菌总蛋白的47%,上清液和沉淀中均有表达,重组蛋白纯化后纯度达90%以上。结论成功克隆hp1188基因,并在大肠杆菌DH5α中获得高效表达。

螺杆菌,幽门;hp1188基因;克隆;表达

幽门螺杆菌(helicobacter pylori,H.pylori)感染与慢性胃炎、消化性溃疡、胃腺癌和黏膜相关性淋巴样组织淋巴瘤密切相关,被世界卫生组织列为胃癌等肿瘤发生的相关致病菌[1-2]。目前,关于H.pylori的致病机制尚不明了,但H.pylori必须首先定植于人胃黏膜才能进一步发挥其致病作用,而黏附是H.pylori定植在胃黏膜表面的前提。决定H.pylori黏附的因素包括动力、尿素酶和黏附素。黏附素是H.pylori黏附的物质基础。目前国内外文献报道的H.pylori黏附素较多[3-6],其中已经证实的有HpA、A lpA、A lpB、BabA和Hop Z,尚有SabA、OipA等仍待确认[7]。……