徐本玲，袁 龙，高全立，范瑞华，张成娟，宋永平

1)郑州大学附属肿瘤医院中心实验室郑州450008 2)郑州大学附属肿瘤医院普外科郑州450008 3)郑州大学附属肿瘤医院生物治疗科郑州450008

(2010-12-23收稿 责任编辑 赵秋民)

肝癌在我国是一种常见的恶性肿瘤，占恶性肿瘤死亡率的第二位，其预后差，非切除的姑息性治疗5 a生存率不到10%［1-2］。细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells，CIK)的抗肿瘤效果已经在许多动物实验和临床试验中得到证实［1，3］。郑州大学附属肿瘤医院采用重组纤维连接蛋白(retronectin，RN)诱导自体CIK联合干扰素-α(interferon-α，IFN-α)治疗晚期肝癌，并评价此方法的可行性及临床应用效果，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 一般资料 收集2009年1月至2010年12月就诊于郑州大学附属肿瘤医院的复发难治的Ⅲ、Ⅳ期肝癌患者14例，中位年龄55(41～78)岁，男10例，女4例。所有患者均被组织病理学明确诊断为肝癌，乙肝表面抗原阳性，均有可测量病灶，预计生存期≥3个月;Karnofsky评分≥60，血常规正常(白细胞计数≥4.0×109L－1，淋巴细胞计数≥0.8×109L－1，血红蛋白≥100 g/L，血小板计数≥100 ×109L－1)，心、肺、肝、肾功能正常，无严重伴随疾病。该研究得到郑州大学附属肿瘤医院伦理委员会的批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 自体CIK的制备 抽取患者外周血50 mL，经人淋巴细胞分离液密度梯度离心获得外周血单个核细胞(PBMC)，悬浮于含体积分数为2%自体血浆的GTT-551(TaKaRa公司)无血清培养基，培养当天加入重组人IFN-γ(1 000 U/mL)，24 h后转入经5 mg/L RN和抗CD3单克隆抗体(mAb)包被过的培养瓶中，加入IL-2(500 U/mL)，在37℃、体积分数为5%CO2培养箱中培养。第4天将刺激后的细胞转入GTT610培养袋中，同时补充体积分数为2%自体血浆的无血清培养基，以后每3 d补加新鲜培养基，同时补加IL-2(500 U/mL)。……