丁培杰，段长恩，张世杰，赵国强

1)漯河医学高等专科学校免疫学教研室漯河462000 2)新乡医学院免疫学教研室新乡453003 3)郑州大学第一附属医院检验科郑州450052 4)郑州大学基础医学院微生物学与免疫学教研室郑州450001

(2010-06-11收稿 责任编辑 徐春燕)

生长激素(growth hormone，GH)是由脑垂体前叶的腺细胞分泌的一种蛋白质，其主要作用是促进生长发育和影响代谢，既往主要用于儿童GH缺乏症的治疗。近年来发现GH具有广泛的生理作用，其免疫调节作用为人们广泛关注［1］。已有研究［2-3］显示GH对T淋巴细胞有重要的调节作用。作者从人静脉血中分离单个核细胞，将其诱导分化为巨噬细胞，观察不同质量浓度的人重组GH(rhGH)对于人巨噬细胞分泌IL-1、IL-6和TNF-α的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 RPMI 1640培养基、胎牛血清(天津TBD公司)，重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rh-GM-CSF，Peprotech 公司)，CD14-FITC、TLR4-PE 及同型对照(深圳晶美生物工程有限公司)，脂多糖(LPS，上海BOYUN公司)。

1.2 巨噬细胞的诱导与鉴定［4］取健康人静脉血，肝素抗凝，Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。用含体积分数10%胎牛血清的RPMI 1640培养基(含终浓度1 000 U/mL rhGM-CSF)培养6 d。观察贴壁细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面CD14和TLR4的表达。

1.3 细胞分组与处理 将1.2中所获得的细胞分为6组，分别加入终质量浓度为1、4、20和50μg/L的rhGH，LPS组加入的终质量浓度为1 mg/L的LPS，空白对照组仅给予RPMI 1640培养液。

1.4 细胞培养上清液中IL-1、IL-6和TNF-α水平测定 于培养4、8、12 h分别吸取培养上清液50 μL，以ELISA法测定各培养上清液中IL-6、IL-1和TNF-α的水平(每组的不同时间点均设3个复孔)。

1.5 统计学处理 采用SPSS 16.0进行分析，应用重复测量数据的方差分析观察6组细胞培养不同时间培养上清液中IL-1、IL-6和TNF-α水平的差异，检验水准α=0.05。……