杨朝军，杨 莉，马艳玲，陈 玲，包佑红，闫文云

（云南省疾病预防控制中心，云南 昆明 650022）

云南省自1989年首次发现成批HIV感染者以来，截止2009年10月底，全省共发现HIV感染者72939人（含外籍3192人）。近几年由于加大监测检测力度，每年新发现HIV感染者近万人，值得一提的是，艾滋病自愿咨询检测（VCT）已经成为发现HIV感染者的重要途径和手段。

云南省疾病预防控制中心VCT门诊自2002年开展工作以来，共检测20002人份，检测出5106（25.5%）份HIV抗体阳性，检测阳性率从2002年的15.6%逐渐上升到2009年的29.6%。在咨询过程中，常常有许多求询者的暴露时间不足3个月，尚不能采用常规的HIV抗体检测的方法，而这部分求询者急于知道感染情况，会谎称已过窗口期。为了及时发现处于窗口期的感染者，本研究尝试采用集合PCR的方法对VCT人群进行HIV核酸检测分析，现将情况报告如下。

1 材料与方法

先把50份HIV抗体筛查为阴性的样本集合成一份样本，每10份样本各取130ul混合组成1个二级集合，在5个二级集合中各取210ul混合组成1个一级集合。再用RT-PCR方法（COBAS Amplicor HIV-1 Monitor 试剂）检测一级集合的HIV RNA，如果结果为阳性，则对5个二级集合检测 HIV RNA，如果有阳性，则对该集合中的10个样本分别检测HIV RNA。如果为阴性则判为未检测到HIV核酸。

2 结果

对2009年HIV抗体筛查为阴性的VCT人群样本及时进行集合PCR检测，即每天分离阴性样本的血浆并保存于零下20度冰柜中，每周进行1次集合并检测HIV RNA，以保证及时发现感染者并通知阳性结果。在1600份集合样本中检测到1份HIV RNA阳性样本，发现1个处于窗口期的HIV感染者，病毒裁量高达70万copy/ml，对该人员的回访调查中发现，他于检测前2周有过1次高危性行为。在以后的追踪随访中，我们连续观察其HIV抗体、CD4和病毒载量变化情况，直到感染发生后6个月。通过6个月的追踪随访，得到了新感染的各项指标的趋势图。其抗体阳转时间约为1.5个月，窗口期内病毒量极高，在抗体阳转时病毒量下降，随后处于稳定上升阶段。在急性感染期 CD4细胞有急速下降，在抗体阳转时回升，以后逐步平稳。该例病人在感染HIV后6个月还有较高的病毒载量（60万C/ml）和较低的CD4细胞数（385个/ul），预示病程进展可能较快，有待进一步观察，结果见表1，CD4数量和病毒载量走势图见图1。

表1 1例HIV感染者感染发生后的检测结果

图1 1例HIV感染者感染发生后CD4计数和病毒载量走势图

3 讨论

VCT的主要内容是鼓励有危险行为的人进行自愿的而不是强制的HIV检测，并在检测前后为受检者提供咨询以及相应的支持和转诊服务，这样不仅可以及时发现、治疗和预防感染，以及为受检者（特别是HIV感染者）提供心理、情感支持，而且还可促使受检者减少危险行为，采取和保持安全行为。

HIV抗体检测是判断是否感染艾滋病的常用方法，但是却存在感染窗口期检测不到抗体、对早期感染者很容易出现漏检的问题，而用PCR方法检测HIV RNA 则可以发现早期的感染者[1]。虽然 PCR检测技术有较高的敏感性，但是成本太高。由于窗口期的病毒量很高，稀释100倍后也可以检测到（最低检测限为400copy/ml）[2]，而我们所采用的是50份样本的集合，相当于稀释50倍，远高于检测的敏感限。所以用集合PCR的方法既能有效地检测到窗口期的感染者，也可以降低成本，这对于血液筛查，保证用血安全性也是有重要意义的。在本次调查中，集合PCR方法可以降低检测费用约96%。

核酸PCR检测技术对HIV感染者的早期诊断具有重要意义。对怀疑有HIV感染但又缺乏确切的血清学依据的人群如HIV阳性母亲所生的婴儿、阳性患者的性伴侣、静脉吸毒者和可疑的血清反应者均可以用核酸PCR检测技术来确诊[3]。由于集合 PCR的方法对检测窗口期的感染者具有灵敏度高、特异性强、成本较低等优点，因此适用于艾滋病流行地区的VCT人群，可以有效地发现及告知HIV早期感染者，从而控制艾滋病的进一步传播。

[1] 姚 均,邵一鸣,何忠平,等.核酸序列扩增早期诊断人类免疫缺陷病毒感染[J].中华检验医学杂志,2002,25(6):363.

[2] 潘品良,许文燕,张 麒,等.集合HIV RNA RT-PCR方法验证及其在 IDUs中窗口期检测的应用[J].中国艾滋病性病,2007,13(3):198-200.

[3] 中国疾病预防控制中心.全国艾滋病检测技术规范[S].北京：2009.