许 鹏，黄 强，刘臣海，谢 放，邵 峰

(安徽医科大学附属省立医院，合肥 230001)

胆管癌是消化系统中预后很差的肿瘤，由于其特殊的解剖部位，早期不易发现，手术根治率低，目前缺乏有效的早期诊断方法。Survivin蛋白为新近发现的凋亡抑制蛋白，与肿瘤的发生、发展有关［1］，参与调控内源性和外源性凋亡路径［2］;Caspase-3为细胞凋亡通路的关键蛋白，Survivin对Caspase-3活性有抑制作用。2005年1月～2007年12月，我们检测了Survivin蛋白和Caspase-3蛋白在胆管癌和胆管癌癌旁正常胆管组织中的表达情况，探讨Survivin和Caspase-3蛋白表达与胆管癌患者的临床特征和预后的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 手术切除的胆管癌标本57份(胆管癌组)及癌旁正常胆管组织23份(对照组)，所有患者术前均未做放疗、化疗等抗肿瘤治疗。57例胆管癌患者中男33例，女24例;年龄36～80岁，中位年龄59岁;组织学分型和分化程度依据2000年世界卫生组织(WHO)标准，其中高分化8例，中分化32例，低分化17例;TNM分期按1997年国际抗癌联盟(UICC)制定的标准，其中Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期15例，Ⅳ期20例。

1.2 Survivin、Caspase-3 蛋白表达检测 兔抗人Survivin，Caspase-3多克隆抗体购买于美国Bioworld生物公司;过氧化物酶标记的链霉素卵白素染色试剂盒(SP-9001)购买于北京中杉金桥生物技术有限公司。所有的手术标本均常规经10%甲醛固定、石蜡包埋，连续4 μm切片。组织切片于90℃烤箱中烘烤10 min，二甲苯、梯度乙醇脱蜡;3%过氧化氢5 min以消除内源性过氧化物酶活性;将载玻片浸泡于0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液(pH=6.0)中，微波修复抗原10 min;10%正常山羊血清工作液封闭;滴加稀释的兔抗人 Survivin抗体(稀释比1∶100)、Caspase-3抗体(稀释比1∶100)，4℃孵育过夜;滴加生物素化标记山羊抗兔IgG工作液37℃反应1 h;滴加辣根酶标记的链霉素卵白素工作液37℃反应1 h;然后DAB显色4 min，苏木精复染细胞核、脱水，中性树脂封片固定，观察实验结果。……