苏乾莲，李 斌，赵 武，秦毅斌，梁家幸，肖爱欢，段群棚，何 颖，黄伟坚

2.广西大学动物科学技术学院，南宁 530005；

戊型肝炎（Hepatitis E，HE）是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的一种经消化道传播的急性病毒性肝炎，呈全球分布，以暴发流行或散发感染的形式存在。其临床和流行病学特点类似甲型肝炎，但主要侵犯青壮年，孕妇感染后病死率可高达20%［1］。1997年，Meng等在美国猪体首次分离到HEV毒株，发现其与美国人源HEV高度相似，并发现其可感染黑猩猩和恒河猴，从而首次证实了HEV种间传播的可能性［2］。随后，陆续在狗、猫、羊、牛、马等与人类密切相关的动物中发现HEV抗体或 RNA，但仍需要进一步深入研究［3－8］。

2007年第12届国际病毒性肝炎和肝病研讨会上，将HEV分为5个基因型，I型和II型仅感染人，III型和IV型为人兽共患，禽HEV被归为戊型肝炎病毒属，暂定为基因V型［9］。在前人研究基础上，本研究建立检测家畜基因I型－IV型HEV通用性RT－nPCR，并对采自广西各地的猪、牛、羊肝粪样本进行HEV检测。

1 材料与方法

1.1 主要试剂 TRIZOL Regent为Invitrogen产；d NTP为上海生工生物工程有限公司产；Ribonuclease Inhibitor为 Ta KaRa产；M－MLV Reverse Transcriptase为 Promega产；Dream TaqTMDNA Polymerase为Fermentas产；Mark1为广州东盛生物科技有限公司产。

1.2 样本和对照品 采集广西地区猪、牛、羊新鲜粪便样本以及各地市场销售或屠宰场新鲜家畜肝脏，尽快检测或－20℃保存备检。戊型肝炎病毒阳性样本由广西大学赠送；猪瘟病毒（CSFV）、伪狂犬病毒（PRV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪细小病毒（PPV）、乙脑病毒（JEV）由本实验室保存；阴性对照为DEPC水。

1.3 引物设计及合成 参考GenBank上4种基因型HEV核苷酸序列，应用生物软件Oligo6.0在ORF2保守区设计……