刘 茜，武 松，汤林华，周水森，黄 芳，潘嘉云，王学忠，杨曼尼，卓玛央金

2.中国疾病控制中心寄生虫病预防控制所，世界卫生组织疟疾、血吸虫病和丝虫病合作中心，上海 200025；

3.云南省寄生虫病研究所，普洱 665000；

4.西藏自治区林芝地区疾病预防控制中心，林芝 860100

课题组于2007与2010年在西藏疟疾流行区墨脱县进行媒介调查发现，该县的按蚊主要包括多斑按蚊复合体和带足按蚊，对多斑按蚊复合体进行实验室种型鉴定发现包括伪威氏按蚊和威氏按蚊［1］，其中伪威氏按蚊为绝对优势蚊种，在伪威氏按蚊中采用巢氏PCR方法检测出间日疟原虫SSU r DNA基因特异序列［2］，从而从分子角度判定伪威氏按蚊为该疟疾流行区的传疟媒介。云南省与西藏疟疾流行区相邻，伪威氏按蚊在该省分布广泛。课题组拟采用线粒体细胞色素B基因对西藏、云南和缅甸拉咱市的伪威氏按蚊进行群体遗传分析，以期为云南省伪威氏按蚊在疟疾传播作用方面提供研究思路。

1 材料与方法

1.1 样本采集 所有按蚊成蚊标本课题组采集于2007年西藏与云南及缅甸现场。采集到的按蚊经过形态学鉴定至多斑按蚊复合体，带回实验室采用分子方法进行具体种型鉴定。5个群体共获伪威氏按蚊共44份样本用于mt DNA－Cytb基因群体遗传分析，见表1。

表1 伪威氏按蚊采集地点与编号Tab.1 Anopheles pseudowillimori collection spot and ID

1.2 mt DNA－Cytb基因扩增

1.2.1 基因提取 采用简易快速DNA提取法［3］，即将1～2个蚊腿置于1.5 m L离心管，加入35μL裂解液（10 mmol/L p H8.0 Tirs HCL，1 mmol/L EDTA，1%Nonidet P－40 100μg/m L蛋白酶 K），匀浆；再加入35μL消毒双蒸水，煮沸5 min；10 000 r/min离心2 min，取上清液置－30℃备用。

1.2.2 扩增体系与条件 采用文献报道的扩增方案［4］，正 向 引 物：5′－GGA CAA ATA TCA TTT TGA GGA GCA ACA G－3′；……