杨 鸿，周春喜，李晶哲，马琰岩，于友华，喻晓春，林 谦，逯金金

(1.中国中医科学院医学实验中心，北京 100700;2.北京中医药大学东方医院，北京 100078;3.美国布鲁克公司北京技术支持中心，北京 100081)

近年来，发展迅速的蛋白指纹图谱技术由于其高灵敏性和高特异性，克服了以双向电泳、多维液相色谱为核心的传统蛋白质组学技术在重复性、高通量等方面存在的缺陷，有望成为今后探索中医证候本质的新研究方法;但在该技术应用过程中仍有许多问题需要进一步解决，如证候样本的收集和预处理方式、蛋白分离提取方法、实验体系的稳定性和重复性等因素都会影响实验分析的结果，最终都需要通过标准化处理来加以解决。本文以慢性心衰气阴虚证为研究对象，通过应用磁珠法结合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF-MS)技术分析慢性心衰气阴虚病人血液蛋白和多肽组分，探索和完善中医证候蛋白质组学研究中的样品收集及预处理、分离制备、检测等方法，为有效获取中医证候血液蛋白及多肽图谱，深入分析中医证候物质基础确定可行的技术方法。

1 材料与方法

1.1 研究对象

慢性心衰气阴虚证(依据《指南》标准，慢性心衰C期(既往或目前有心衰症状)患者，依据慢性心衰中医证候诊断标准诊断有气阴虚证的患者。年龄30岁～70岁)，18例来自北京中医药大学东方医院，18例对照血样来自健康志愿者(年龄30岁～70岁)。

1.2 血液样品收集与预处理

采用EDTA-K3抗凝管、聚丙烯干燥管采集患者治疗前或健康志愿者外周血各4ml，室温静置1h，4℃ 3000r/min离心10min，分离血浆、血清分装于500μl EP管中，冻存于－80°C备用。……