巩天祥,冯 伟,李婉宜,张 强,戴 军,裴德翠,蒋忠华,李明远

2.四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室,成都 610041

小鼠β防御素2在MDCK细胞中的表达和抗流感病毒活性研究*

巩天祥1,冯 伟1,李婉宜2,张 强2,戴 军2,裴德翠2,蒋忠华2,李明远2

目的探索小鼠β防御素2(mouse β-defensin 2,mBD2)表达载体在狗肾传代细胞(Madin-Darby canine kidney,MDCK)中的表达和抗甲型流感病毒(influenza A virus,IAV)活性。方法将真核表达载体pcDNA3.1/mBD2利用脂质体法转染MDCK细胞,G418筛选得到稳定转染的阳性细胞,用RT-PCR方法鉴定目的基因和免疫荧光法鉴定目的蛋白在转染细胞中的表达。用TCID50测定转染细胞的抗IAV活性。用pcDNA3.1/mBD2质粒免疫小鼠,观察死亡保护率。结果pcDNA 3.1/mBD2转染MDCK细胞后在细胞中稳定表达,转染细胞的TCID50比对照组的病毒效价降低近77.98倍;重组质粒免疫小鼠后,死亡保护率为55.55%。结论mBD2能够在MDCK细胞中稳定表达,并且在体外及体内实验中显示出抗流感病毒活性,该结果为抗流感病毒制剂研究奠定了实验基础。

小鼠β防御素2;表达载体;甲型流感病毒

防御素是一类富含半胱氨酸的内源性抗微生物多肽(anti-microbe peptide,AMP)。根据二硫键的位置和空间结构的不同,哺乳动物防御素可以分为3类 :α-防御素 ,β-防御素和 θ-防御素[1]。β-防御素(β-defensin,BD)为固有或诱导性表达的多肽,主要由皮肤,支气管和泌尿生殖道上皮细胞所分泌。它们具有广谱抗微生物活性,对细菌,真菌及包膜病毒具有很强的杀伤活性[2],而且具有抗肿瘤细胞活性[3]。它在局部粘膜免疫中发挥重要作用,构成机体抵御外界病原微生物入侵的第一道防线。因此,被认为是新型抗生素的理想替代品。……