王路梅，杨晋川，郭 惠，张 雷，景怀琦

从蟑螂体内检出O1群霍乱弧菌＊

王路梅，杨晋川1，郭 惠1，张 雷1，景怀琦2

霍乱弧菌可引起霍乱的发生，是国家法定的甲类传染病，多检出于水体，海产品和水产品中；而从蟑螂体内检出霍乱弧菌尚未有报道。笔者于2010年12月份从蟑螂体内检出一株O1群霍乱弧菌，稻叶血清型。现将结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 分别在徐州市区的超市、医院、居民区、宾馆、餐饮店，采集蟑螂共计30份。

1.1.2 试剂、血清及设备 霍乱弧菌荧光定量PCR检测试剂盒为深圳易瑞生物制品有限公司生产；霍乱弧菌O1/O139免疫磁珠为天津生物芯片技术有限责任公司产品；碱性蛋白胨水、TCBS为杭州天和微生物试剂有限公司生产，弧菌显色培养基为法国Chromagar产品，弧菌生化鉴定管购自广东环凯微生物科技有限公司；霍乱弧菌多价、小川、稻叶型血清由中国药品生物制品鉴定所提供。Invitrogen Bead RetrieverTM全自动微生物磁珠分选仪、ABI 7500荧光定量PCR仪、智能恒温恒湿培养箱单位自备。

1.2 方法

1.2.1 分离方法 将采集到的单只蟑螂用无菌的方法剖开蟑螂，取其肠内容物，剪碎放入2mL碱性蛋白胨水中，36℃增菌8h，取8h增菌液1mL进行霍乱弧菌荧光PCR检测，荧光PCR检测阳性者进行2次增菌，36℃培养18h；分别取PCR阳性的8h增菌液和二次增菌液各500μL进行免疫磁珠富集，将免疫磁珠富集后的混悬液分别划线于TCBS平板和弧菌显色平板，36℃培养18h。

1.2.2 血清凝集 挑取TCBS和弧菌显色平板上的可疑菌落转种于营养平板分纯，取纯菌落分别与O1群霍乱弧菌多价和O139群霍乱血清凝集，如O1群多价血清凝集阳性再分别与稻叶型和小川型血清凝集，生理盐水阴性。……