张小娟，张荣光，段广才，范青堂

2.郑州大学河南省分子医学重点学科开放实验室，郑州450001

幽门螺杆菌抗原基因ureB在乳酸菌中的克隆表达与免疫反应性研究

张小娟1，张荣光2，段广才2，范青堂2

目的 为了开发幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）口服疫苗，将Hp尿素酶B（UreB）在食品级乳酸乳球菌NZ3900菌株中进行表达，并研究其免疫反应性。方法 PCR扩增HpMEL－HP27菌株ureB基因（基因号：FJ436980），将其克隆入大肠杆菌－乳酸乳球菌穿梭质粒pNZ8110中并转化乳酸乳球菌NZ3900；采用正交试验确定目的蛋白表达的适宜条件；应用western－blot鉴定其免疫反应性。结果 成功扩增了HpMEL－HP27菌株ureB基因，构建了ureB基因的乳酸菌NICE（Nisin－controlled expression）原核表达系统；UreB蛋白适宜的表达条件为：在ureB重组菌生长至对数生长前期（OD600≈0.3～0.4）加入终浓度为40ng/mL的nisin，诱导表达5h，可溶性UreB蛋白表达量最高，可达27.26μg/mL培养基。可溶性UreB蛋白的表达占上清蛋白的比例最高可达20.19%；Western－blot结果显示乳酸乳球菌表达的UreB抗原蛋白具有良好的免疫反应性。结论 结果提示应用乳酸乳球菌构建幽门螺杆菌食品级疫苗可能具有较好前景。

幽门螺杆菌；乳酸乳球菌；NICE；UreB

2.郑州大学河南省分子医学重点学科开放实验室，郑州450001

幽门螺杆菌（Helicobacterpylori，Hp）是一种革兰氏阴性螺旋杆菌，能够导致胃炎、胃和十二指肠溃疡、胃黏膜相关淋巴瘤和胃癌［1－3］。1994年，Hp被世界卫生组织（WHO）列为Ⅰ类致癌原。此外，Hp还与糖尿病、冠心病、血小板减少性紫癜等一些肠道外疾病有重要关系［4－6］。目前Hp感染的主要治疗方案是联合应用质子泵抑制剂、铋剂和抗生素的三联疗法，杀灭细菌效率超过90%。但是，这种治疗方案仍存在以下问题：药物疗法副作用较多，如口腔异味、腹痛、恶心、呕吐等；……