史亚东，赵子方，朱 丹，张龙现，宁长申，菅复春

LAMP（环介导等温扩增）的原理及在寄生虫检测上的应用＊

史亚东，赵子方，朱 丹，张龙现，宁长申，菅复春

2000年，Notomi等［1］建立了一种快速、简单、灵敏、特异并且低成本的核酸扩增方法——环介导等温扩增法（LAMP），这种新颖的核酸扩增方法具有许多优势［2－4］：（1）扩增效率极高，60min内扩增产物可达到靶基因的109～1010倍；（2）操作简单，只需在65℃左右的恒温条件下将反应物混合即可，不需要复杂的温度变化过程；（3）灵敏性高，扩增模板只需10拷贝或更少；（4）特异性高，设计4条引物识别靶基因上6个不同区域；（5）结果判定简单，可以通过反应副产物直接肉眼观察，也可以通过浊度仪实时监控，无需电泳。LAMP方法的这些优势，使其短时间内在病毒、微生物、寄生虫等检测上广泛应用。以下就LAMP方法的原理及在寄生虫检测上的应用，简述如下。

1 LAMP原理［1，5］

1.1 引物 LAMP方法需要根据靶基因设计两对特殊引物，分别是内引物FIP和BIP、外引物F3和B3。它们特异识别靶基因的6个不同区域：3′端的F3c、F2c、F1c和5′端的B1、B2、B3。FIP由F2（与F2c互补）和F1c构成；BIP由B2（与B2c互补）和B1c构成，如图1。

图1 LAMP的引物组成及对应区域

LAMP方法的引物设计较为复杂，但有专门软件可以设计LAMP引物，这使LAMP方法变的很易操作，Eiken GENOME SITE网站（http：//primerexplorer.jp/e/）专门开发了 LAMP引物设计软件，研究者可以通过该软件获得精准的LAMP引物。

1.2 循环过程 在65℃左右时，DNA双链处于解链和聚合的动态平衡中，一个LAMP引物可以和靶基因链的一端互补结合，然后开始利用DNA聚合酶通过链置换作用合成DNA，置换并释放出一条单链DNA，这不像PCR方法那样需要通过热变性来得到单链DNA。……