王 杨,高 辉,黄云昆,付晓野,徐 敏

(昆明市延安医院检验科,云南昆明 650051）

铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa,PA）广泛分布于自然界,属于条件致病菌,在正常人体内很少致病,却是医院感染的重要病原菌之一。随着新型广谱抗菌药物的广泛应用,PA对β-内酰胺类抗菌药物的耐药性日益严重,限制了抗生素的选择,给临床抗感染治疗带来了极大的困扰。该研究收集临床标本中分离的20株PA,通过研究其β-内酰胺酶基因型及耐药性特点,为进一步研究昆明地区PA耐药基因的分布情况奠定基础,为减少耐药PA的产生、提高临床抗感染治疗效果提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 菌株来源

2009年6月-2009年10月昆明市延安医院(三甲医院）临床标本中分离的非重复性PA20株。质控菌为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。

1.2 药敏纸片和培养基

16种药敏纸片种类详见药敏结果表中所列,亚胺培南、美洛培南、环丙沙星、为英国Oxoid公司产品,其余药敏纸片为北京天坛药物生物技术开发公司产品。药敏试验用M-H培养基,为英国Oxoid公司产品。

1.3 细菌鉴定与药敏试验

用法国生物梅里埃VITEK32细菌鉴定仪进行细菌鉴定,药敏试验采用K-B琼脂扩散法,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS）的标准判读药敏试验结果。

1.4 提取细菌基因组DNA

用细菌基因组提取试剂盒提取细菌DNA,按试剂盒说明书操作,试剂盒由天根生物技术有限公司生产。

1.5 检测β-内酰胺酶基因

用Biometra Personal Cycler PCR仪扩增7种β-内酰胺酶基因,PCR扩增引物由北京百泰克生物技术有限公司合成,7种靶基因引物序列见表1[1]。……