蒿广德,刘 敏,齐文玲,蒲丽蓉

(广元市第一人民医院输血科,四川广元 628017）

随着成分输血的不断深入推广应用,血小板输血已成为临床输血治疗的重要手段之一,在血小板质量和数量存在问题的疾病治疗中发挥了重要的作用。人类血小板同种抗原(human platelet alloantigens,HPA）位于血小板膜糖蛋白上,这些蛋白是由遗传决定的,HPA的基因频率在不同种族、不同区域中的分布是不同的。在临床血小板输血过程中,如果血小板同种抗原不相匹配[1],可导致受血者机体产生血小板同种抗体,引起同种免疫血小板减少综合症、输血后紫癜、血小板输注无效等。目前检测出的24个HPA抗原中除HPA-14bw抗原是由于在核苷酸1901到1911位置上AAG等3个碱基缺失外,其他抗原均由于单核苷酸取代而产生。鉴于HPA在血小板输血中的重要意义,现对四川省广元市113名固定血小板献血员HPA-9进行基因分型,报告如下。

1 材料与方法

1.1 样本收集128名四川省广元市固定血小板献血者,汉族,相互之间无血缘关系。采集每个血小板供者300 μ l全血,EDTA 抗凝 。

1.2 试剂与仪器设备Bio-RAD my cycler PCR扩增仪(Bio-RAD,USA）,凝胶成像系统(UVP,USA）。

1.3 基因组DNA的提取按北京天根DNA提取试剂盒说明书操作提取DNA,每份标本溶解于30 μ l TB溶液中。

1.4 HPA-9基因分型HPA-9基因分型使用G&T公司试剂,HPA-9基因分型分为HPA-9a和HPA-9b基因检测,内对照是人类生长激素,产物大小为429 bp,HPA-9基因检测产物大小为196 bp。HPA-9基因分型基因检测根据PCR产物的有无以及产物是否是预期大小一致的片段来判断基因分型。根据说明书反应体系为 10 μ l,引物混合物 7 μ l,DNA1 μ l(20-50 ng）,Taq酶1 μ l(0.25 u）。扩增参数:按94℃变性3 min;94℃,30 s、60℃,30 s、72℃,90 s;30 个循环后72℃延伸5 min;4℃循环参数扩增。……