李 颖,孙 新,郭华涛,熊 英,翟羽佳,徐 雷

(北华大学1.附属医院心内科,2.生命科学中心,吉林 吉林市 132011）

近年来研究发现神经生长因子(NGF）家族及其受体在心血管系统中存在广泛表达,并参与多种心脏疾病的病理生理过程。我们前期的研究表明[1],外源性给予NGF可有效地保护大鼠心脏交感神经支配,可维持一定数量的神经元存活,使心肌损伤坏死面积减少。NGF还可促进心脏缺血组织的血管形成。我们拟研究NGF预处理对大鼠心肌VEGF及其受体KDR/flk-1表达的影响,探讨NGF对心肌损伤修复的保护作用机制。

1 材料与方法

1.1 动物分组及模型建立雄性成年Wistar大鼠60只,随机分为3组:NGF预处理组和非NGF预处理组和对照组(每组20只）。大鼠NGF预处理使用注射用鼠神经生长因子(0.5 μ g/kg）尾静脉注射。采用结扎左冠状动脉前降支制作大鼠急性心肌梗死动物模型。于手术后7天取材。乙醚麻醉下处死动物,大鼠股动脉采血,取大鼠心肌组织,分别做常规石蜡包埋和即刻液氮冷藏。

1.2 试剂注射用鼠神经生长因子购自武汉海特生物制药股份有限公司;Trizol为美国Invitrogen公司产品;RNA PCRKit(AMV）Ver.3.0试剂盒购自宝生物工程(大连）有限公司;血管内皮生长因子(VEGF）及其受体KDR/flk-1 PCR引物由上海英俊生物科技有限公司合成。VEGF引物(495 bp）,上游:5′-tggctttactgctgtacctcc-3′,下游 :5′-acaaatgctttctccgctct-3′;KDR/flk-1 引物(418 bp）,上游 :5′-tcacggttgggctactgc-3′,下游:5′-agaccttctgccatcacg-3′;内参 GAPDH 引物 (139 bp）,上游:5′-tatcggacgcctggttac-3′,下游:5′-ctgtgccgttgaacttgc-3′。

1.3 方法

1.3.1 心肌组织病理切片观察:取心肌标本制作石蜡切片,HE染色后观察形态学改变。心肌损伤程度用专用显微镜测量及Motic Imaging Previmer医学图像分析系统进行结果分析。选择单点彩色分割(放大倍数为66倍）测定心肌坏死灶面积占心肌总面积的百分数(面密度,%）。……