贺建宇 张利能

1.上海市第六人民医院奉贤分院肿瘤科，上海 201400；2.复旦大学上海医学院生物化学与分子生物学教研室，上海 200032

烷基磷脂(alkyphosholipids，APLs)和烷基磷酸胆碱(alklphosphocholine，APCs)作为新一代膜信号PI3K/Akt传导抑制剂，已成为国内外研究的热点［1-2］。研究表明，APLs和APCs能抑制多种肿瘤细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡，具有明显抑制肿瘤生长作用，其机制尚未完全阐明［3-4］。本研究将观察APCs类药物Erufosine (erucylphophohomocholine or erucylphospho-N,N,N-trimethylpropylammonium)对胃癌细胞及骨髓细胞的增殖、凋亡的影响，并探讨此种影响与Akt蛋白表达的关系。

1 材料和方法

1.1 材料

人胃癌AGS细胞系购于上海细胞库；人骨髓细胞、M3534 Metho- Cult培养基和H4534 MethoCult培养基购自StemCell公司；8周龄BALB/c小鼠购自中科院上海动物所；Erufosine为美国波士顿大学临床医学中心姚敏博士惠赠，用0.9%NaCl溶液配置成20 mmol/L工作母液。RPMI 1640培养液购于美国GIBCO BRL公司；胎牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品；MTS{tetrazolium compound［3-(4,5-dimethylthia-zol-2-yl)-5-(3-carbo-xymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetra-zolium, inner salt;］}为美国Promega公司产品；兔抗Akt抗体、内参β-actin和辣根过氧化物标记抗兔二抗购于Santa Cruz公司；硝酸纤维素膜购自Invitrogen公司；Matrigel购自BD公司；胶原酶和弹性蛋白酶购自Roche公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养

胃癌AGS细胞常规方法复苏，接种于含5%胎牛血清的RPMI 1640培养液瓶中，每毫升培养液含青霉素和链霉素均为100 U，置于37 ℃、CO2体积分数为5%的饱和湿度培养箱内培养，生长至覆盖70%培养瓶时，用0.25%的胰酶消化传代，取对数期的细胞进行实验。

1.2.2 鼠骨髓细胞的收集

雄性8周龄BALB/c小鼠用CO2吸入法处死。在无菌层流洁净工作台上用70%乙醇喷雾消毒小鼠。完整干净切取小鼠胫腓骨，切除长骨末端的骨骺端至骨髓腔。取一平头27 G注射器针头插入骨髓腔，注入含5%胎牛血清的无菌RPMI1640培养液2 mL，然后再抽出至骨干颜色变苍白，收集的细胞悬液注入50 mL的圆锥瓶中保持在湿冰上备用。……