熊正文 张华东 胡海霞 黄勇 李宏伟 寻凤华

中国人民解放军二五一医院病理科(北京军区肿瘤病理技术研究诊疗中心)，河北 张家口 075000

宫颈鳞癌是妇科常见的恶性肿瘤之一，其发病率及病死亡率呈逐年上升趋势［1］。近年研究表明，转录抑制因子Snail［2-4］和热休克蛋白70(heat shock proteins 70，HSP70)［5-7］与人体肿瘤的发生、发展、侵袭及转移等关系十分密切。本研究应用原位杂交(in situ hybridization，ISH)技术检测了Snail mRNA及HSP70 mRNA在宫颈良、恶性病变中的表达及其与宫颈癌生物学病理特征的关系，旨在分子水平探讨两者的表达与宫颈癌生物学特征的相关性。

1 资料和方法

1.1 一般资料

收集本科2008—2010年间宫颈组织标本蜡块共120例，其中慢性宫颈炎15例，宫颈上皮内瘤样变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)35例，宫颈癌70例，均经病理确诊，未进行术前放化疗；宫颈癌患者年龄26～87岁，中位年龄48岁，其中36例≤48岁，34例> 48岁；70例宫颈癌标本中，高分化19例，中分化44例，低分化7例。根据国际妇产科联盟(FIGO)临床分期标准，70例宫颈癌标本中，Ⅰ期17例，Ⅱ期43例，Ⅲ期10例。浸润癌浸润深度为：＜1/3者51例，≥1/3者19例，伴淋巴结转移者24例，无淋巴结转移者46例。

1.2 试剂及其来源

Snail、HSP70原位杂交试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司，探针为针对人Snail靶基因的mRNA序列：5’-AGAGTTTACC TTCCAGCAGCCCTACGACCAGGCCC-3’；5’-AAGGCCTTCAACTGCAAATACTGCAACAAG GAATA-3’；5’-TACCAGTGCCAGGCGTGTG CTCGGACCTTCTCCCG-3’。HSP70靶基因的mRNA探针序列为：5’-CCTGGCAGCCCTT TCTCAAGGACCACCGCA-3’；5’-AAGCATTCG TCCGGTTGCGCTTTCCTTTCT-3’；5’-AG AAAGTGCGCCGTGCCATCGAGCAGCTGG-3’。显示系统为生物素化鼠抗地高辛和过氧化物酶标记链霉卵白素(SABC-POD)，DAB显色。

1.3 原位杂交

石蜡切片复温，脱蜡至水。3%H2O2室温作用10 min，蒸馏水洗3次，3%柠檬酸稀释的胃蛋白酶室温消化30 min。1%多聚甲醛室温固定10 min，蒸馏水洗3次，按每张切片滴加20 μL预杂交液，湿盒放入40 ℃恒温箱中4 h。滴加杂交液每片20 μL，38～42 ℃恒温箱中过夜。3……