李 晶,朱 莉,赵春华

中国医学科学院 北京协和医学院 基础医学研究所组织工程研究中心,北京 100005

国内外研究已经使用胚胎干细胞及诱导多潜能干细胞在一定条件下体外诱导分化成为胰岛素分泌细胞,且获得的细胞具有一定体内外分泌功能[1-3],该类研究为细胞替代移植治疗糖尿病提供了思路,但细胞来源少,细胞成瘤性及伦理限制等问题限制了其向临床转化。本课题组以往研究表明,骨髓、脂肪及脐带来源间充质干细胞 (mesenchymal stem cell,MSC)具有亚全能干细胞[4]的特征,其能向多胚层分化且具有低免疫原性的特征[5],同时该种细胞来源广泛并且不受伦理学限制,有望成为临床细胞移植的良好种子细胞。本研究将采用可用于临床的非病毒诱导体系探讨使用UC-MSC获得胰岛细胞的方法,并研究诱导后细胞是否具有与胰岛相似的功能,从而为细胞移植治疗糖尿病提供依据。

材料和方法

试剂 高糖DMEM培养基购自美国Hyclone公司,DMEM/F-12、胎牛血清、青链霉素和胰蛋白酶-EDTA购自美国Gibco公司,维甲酸、exendin-4、尼克酰胺、碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,bFGF)、表皮细胞生长因子 (epidermal growth factor,EGF)均购自美国Sigma公司,Activin A购自英国Pepro Tech公司,Trizol购自美国 Invitrogen公司,Oligo dT、M-MLV逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTP和RNA酶抑制剂购自日本Takara公司,小鼠抗人胰岛素单克隆抗体购自美国Santa Cruz公司,兔抗人 C-肽多克隆抗体购自英国ABcam公司,罗丹明标记的山羊抗小鼠IgG、罗丹明标记的山羊抗兔IgG购自北京中杉金桥公司。

UC-MSC的分离、培养、表型鉴定及分化潜能 UC-MSC取自北京协和医院剖腹产足月胎儿……