陈娜莎，华荣虹，闫丽萍，赵付荣，王 斌，杜 鹃，王云峰，童光志*

(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海200241；3.新疆农业大学动物医学院，内蒙古乌鲁木齐830052；4.黑龙江大学生命科学与技术学院，黑龙江哈尔滨150080)

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus，JEV)，属于黄病毒科黄病毒属成员，其基因组为单股正链RNA，长约11 kb，含单一开放阅读框，编码一个多聚蛋白前体，经蛋白酶切割加工后产生3个结构蛋白：核衣壳蛋白(C)、膜蛋白(PrM/M)、囊膜糖蛋白(E)和 7个非结构蛋白：NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b、NS5[1-2]。E 蛋白是 JEV主要的结构蛋白，在病毒的吸附、融合、血凝、细胞趋向性、病毒毒力和诱导保护性免疫反应中起重要作用[3-5]。

黄病毒属包括超过70种具有血清交叉反应特性的不同病毒，如流行性登革热病毒(DV)、脾传脑炎病毒(TBEV)、圣路易斯脑炎病毒(SLEV)、西尼罗病毒(WNV)、墨累河脑炎病毒(MVEV)、昆津病毒(KUNV)和尤苏它病毒(UV)等[6]。因此，建立一种黄病毒属病毒间的鉴别检测方法具有重要的意义。

本实验室克隆JEV的E蛋白结构域I(EI)基因序列，通过部分重叠的短肽融合表达，鉴定出E蛋白抗原表位E19145GTTTSENHGNYSAQVG160[7-8]。该表位与报道的线性中和表位有12个氨基酸的重叠[9]。

为确定E蛋白抗原表位E19与报道的线性表位是否为同一个中和表位，本研究采用从羧基端(C端)和氨基端(N端)进行逐个氨基酸缩减的方法对E19抗原表位的核心序列进行了精确的定位，并通过JEV株和黄病毒属不同病毒代表株之间的同源序列比较，设计一系列表达融合蛋白的短肽，表达转印后研究了E19表位的功能，为进一步研究E蛋白结构和功能以及建立乙型脑炎临床鉴别诊断方法奠定了分子生物学基础。……