陈宏备，施开创，李向涛，郑 敏，郑喜邦*，李 军

(1.广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005；2.广西动物疫病预防控制中心，广西南宁530001)

脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus，EMCV)能够引起人畜共患疾病，EMCV感染主要引起仔猪的脑炎、心肌炎以及母猪的繁殖障碍。我国于2005年首次从病死仔猪和流产胎儿分离到EMCV[1]，血清学调查表明我国规模化猪场感染EMCV现象普遍存在[2]。小鼠对EMCV极为易感，主要表现为急性脑炎、心肌炎、糖尿病、睾丸炎、眼结膜炎等[3]，因此一般利用小鼠作为动物模型研究EMCV的致病机理。已有研究报道EMCV感染小鼠后心肌中IL-1β、TNF-α的上调水平与心肌炎的严重程度呈正相关[4]，感染致心肌炎型EMCV或致糖尿病型EMCV的小鼠经用抗IL-1β或TNF-α的单克隆抗体(MAb)处理后心肌炎或糖尿病的发病率显著下降[5-7]，表明促炎细胞因子IL-1β、TNF-α在EMCV的致病机制中发挥重要作用。本研究建立了小鼠IL-1β、TNF-α的TaqMan real-time PCR检测方法，为定量检测促炎细胞因子mRNA转录水平、探讨EMCV的致病机制提供有效的技术平台。

1 材料和方法

1.1 病毒及实验动物 EMCV GXLC株(FJ897755)由广西动物疫病预防控制中心分离鉴定和保存[8]，在BHK-21细胞系中传至第3代，病毒效价为108.2TCID50/mL。4周龄SPF级BALB/c雄性小鼠购自广西医科大学实验动物中心，经RT-PCR及中和抗体试验检测EMCV均为阴性。

1.2 主要试剂及仪器TaqDNA聚合酶、M-MLV反转录酶、HindⅢ和EcoRⅠ限制酶、pMD18-T载体和胶回收试剂盒均购自宝生物工程(大连)有限公司；质粒DNA小量提取试剂盒购自杭州博日科技有限公司；E.coliDH5α株感受态细胞、2×TaqPCR MasterMix试剂和总RNA提取试剂盒均购自天根生化科技(北京)有限公司；ROX参比染料购自天津天浩源科技有限公司。……