胎肾细胞悬液对去势大鼠骨组织骨保护素表达的影响
2011-08-02笪晨星郑清莲武警陕西总队医院消化内分泌科陕西西安70054
笪晨星 郑清莲 顾 勇 (武警陕西总队医院消化内分泌科,陕西 西安 70054)
“肾藏精,主生殖”理论的精辟论断见于《素问·上古天真论》,是中医理论强调“肾”的首要功能,该理论一直有效地指导着中医药治疗生殖系统疾病的临床实践。前期从骨转化的生化学方面,骨形态计量学,骨密度,骨矿含量和骨生物力学等角度发现,利用胎鼠去除肾包膜的肾脏制取悬液——胎肾细胞悬液(FRCS),能够提高大鼠血清性激素水平,具有抗衰老及改善实验大鼠骨质疏松的作用〔1~3〕。本实验采用去卵巢的经典骨质疏松模型,以FRCS为试剂,研究补肾药对骨组织骨保护素(OPG)表达的影响,以进一步证实“肾主骨”理论的科学内涵。
1 材料与方法
1.1 实验动物 孕19~21 d的健康同种SD雌性大鼠共计100只,普通级。4月龄雌性清洁级SD。大鼠75只,体重为200~220 g,普通级。标准大鼠饲料(均由西安交通大学医学院动物中心提供),所有实验动物饲养条件一致,SD大鼠取得屏障系统使用许可证,合格证号:医动字第26021108。
1.2 药物
1.2.1 胎肾细胞悬液制备 按照文献〔3〕:将孕19~21 d SD母鼠,脱臼处死,无菌取出胎肾,去除肾包膜、肾蒂,并将其剪碎,移入200目尼龙网,用5 ml注射器针芯研磨,边研磨,边用生理盐水冲洗,收集细胞悬液。
1.2.2 苯甲酸雌二醇 西安化学试剂厂生产,生理盐水稀释配成0.25 mg/ml溶液。
1.3 试剂 E2放射免疫检测试剂盒均购自天津九鼎医学生物工程有限公司。碱性磷酸酶(AKP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)比色法检测,试剂盒由南京建成生物研究所提供。OPG多克隆抗体一抗,二抗,SP免疫组化染色试剂盒,DAB显色试剂盒等购自武汉博士德生物工程有限公司。……
