阎红娥 刘 甡 李 爽 王春玲 (佳木斯大学第一附属医院呼吸内科，黑龙江 佳木斯 154003)

Twist属于具有碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)结构的转录因子家族成员，近期研究证实Twist参与了某些上皮来源的肿瘤细胞发生上皮-间充质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)，并促进其侵袭转移〔1〕。本实验应用免疫组化法检测Twist在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与血管内皮生长因子(VEGF)、微血管密度(MVD)及与NSCLC临床病理特征之间的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 组织标本 收集我院2007～2009年手术切除并经病理确诊的NSCLC患者50例，年龄35～76〔平均(60.3±12.6)〕岁，其中男29例，女21例。所有病例术前均未行放疗、化疗和免疫治疗。按照世界卫生组织(WHO)肺及胸膜肿瘤组织学类型修订方案分为:肺鳞癌31例，肺腺癌19例。组织学分级:高分化11例，中分化23例，低分化16例。TNM分期:Ⅰ期14例，Ⅱ期23例，Ⅲ期13例;有淋巴结转移21例，无淋巴结转移29例。远离癌旁5 cm以上的正常肺组织15例作为对照组。

1.1.2 主要试剂 Twist兔抗人多克隆抗体(美国Santa Cruz公司)，VEGF兔抗人多克隆抗体、兔抗人第8因子相关抗原多克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠、羊抗兔免疫球蛋白(IgG)及链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)免疫组化试剂盒、二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)。

1.2 方法 石蜡标本均行5 μm切片，连续切4片，一张切片行HE染色核实病理诊断，其余切片按SP试剂盒操作步骤检测组织中Twist、VEGF、凝血因子Ⅷ(FⅧRAg)的表达，以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照，用武汉博士德生物工程有限公司提供的已知阳性切片作阳性对照。

1.3 结果判定

1.3.1 Twist的阳性表达 Twist蛋白表达于细胞质，呈清晰的棕黄色为阳性表达。……