卜 强,汤华明,谈 健,胡 潇,王东文

(1.山西医科大学第一临床医学院泌尿外科,山西太原,030001;2.江苏大学附属人民医院 泌尿外科,江苏镇江,212001)

血小板源性生长因子 -D(Platelet-derived growth factor,PDGF-D)是新近发现的 PDGF家族的新成员,特异性结合并激活二聚体受体PDGFRβ[1],从而发挥其生物学活性。目前发现PDGF-D参与胚胎的发育成熟、调节细胞增殖、凋亡、转化、迁移、侵袭、血管生成等多种生物学活性,在肿瘤方面的研究已涉及前列腺癌、肾癌、肺癌、卵巢癌等[2-4],因而成为生长因子家族的一个研究热点,有研究发现,PDGF-D在膀胱移行细胞癌(BTCC)中高表达,与膀胱癌的发生和发展密切相关[5],然而,关于 PDGF-D对膀胱癌细胞增殖及相关机制的研究尚未见报道。PI3K/Akt信号通路在肿瘤的发生发展过程中起着重要的调节作用,包括转录、翻译、代谢、血管新生以及细胞周期和凋亡的调控[6],信号通路的激活常发生在恶变早期和肿瘤进展期,同时,信号通路激活程度也是肿瘤患者预后的重要指标。因此,本研究选择膀胱癌细胞株 T24,观测外源性 PDGF-DD对其增殖及信号转导通路的影响,阐述 PDGF-DD诱导膀胱癌细胞增殖的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人膀胱癌细胞 T24(上海拜力生物技术有限公司),小牛血清(杭州四季青公司),DMEM培养液(Gibco公司),PDGF-DD为美国 Peprotech公司产品,MTT、LY294002、PDTC、雷帕霉素(Sigma公司)。兔抗人 NF-κB p65多克隆抗体(Santa Cruz公司 ),兔抗人 Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR抗体(Cell Signaling公司),羊抗兔 IgG(中杉公司)。酶标仪(Bio-Rad公司),流式细胞分选仪(FACSAria,BD公司)。其余试剂均为进口或国产优级试剂。

1.2 细胞培养

人膀胱癌细胞 T24用含有 10%小牛血清的DMEM培养液,在 37℃、5%CO2且饱和湿度条件下培养,隔天换液,待细胞生长至约 80%融合时,用 0.25%胰酶和 0.02%EDTA的混合消化液分散成单细胞,传代培养,取对数生长期的细胞进行实验。……