郝海峰，刘芳君，王冬梅，李静敏，田余祥

(1.大连医科大学生物化学教研室，辽宁，大连 116044;2.河南省护理职业学院解剖学教研室，

3.河南省护理职业学院生物化学教研室，河南安阳 455000;4.大连医科大学机能实验室，辽宁大连 116044;5.大连医科大学第二临床学院眼科教研室，辽宁大连 116023)

人核糖核酸酶抑制因子(human ribonuclease inhibitor，hRI)是广泛存在于哺乳动物细胞质中的一种酸性蛋白质(pI=4.7)，分子量约为50 ku［1］。hRI含有32个高度保守的半胱氨酸残基，其中至少30个半胱氨酸的巯基处于还原状态，还原型巯基是保持RI正常生物学活性所必需的［2］。hRI基因定位于染色体11p15.5，其cDNA全长1 698 bp。我们的前期研究表明，hRI具有抗氧化损伤的作用［3］。血管生成因子Angiogenin具有促进新生血管形成的作用，hRI与其紧密结合后，强烈抑制Angiogenin的活性。应用hRI后，一些实体瘤细胞生长明显受到抑制，瘤组织周边的新生血管明显减少［4］。本文通过研究重组GST-hRI对青光眼滤过术后瘢痕形成的抑制作用，为GST-hRI的研发应用提供重要的实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒和菌株 大肠杆菌Rosetta和重组质粒pGEX-6p-1-hri由大连医科大学生物化学教研室保存和构建。

1.1.2 主要试剂 胰蛋白胨、酵母提取物购自OXODID公司;RNaseA、酵母RNA购自Sigma公司;山羊抗兔辣根过氧化物酶标记的二抗购于华美生物工程公司;Glutathione-Sepharose 4B亲和层析柱购自上海索莱宝生物科技有限公司。兔抗人RI抗体由本实验室制备和提纯。

1.1.3 主要仪器 TDL 40B高速低温离心机(德国Zentifug公司);Tanon GIS-100凝胶成像系统〔天能科技(上海)有限公司〕;YZ-5C2型裂隙灯(苏州医疗器械厂)。

1.1.4 实验动物 新西兰大白兔，体质量1.5～3.5 kg，♀♂各半，由大连医科大学动物中心提供。……