张 艳，刘珊丽，曹志斌，张建东，崔 明，2

(郑州大学1.基础医学院药理学教研室、2.第五附属医院，河南 郑州 450052)

脑缺血是临床上常见的急性脑血管疾病，具有高致残率和高致死率。目前临床缺乏理想的治疗药物，因此寻找有效的神经保护药物从而降低后遗症的发生率仍然是当前脑缺血研究的重点。原花青素(Procyanidin，PC)是一种广泛存在于植物中的天然抗氧化药物，研究表明，它具有减轻脑缺血大鼠的脑组织水肿、保护神经元的作用。而近年来研究发现酸敏感离子通道(acid-sensing ion channels，ASICs)在缺血性脑损伤中发挥了重要的作用。本研究旨在探讨PC的脑保护作用及机制，为脑缺血的防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 实验采用健康成年♂ SD大鼠，体质量(300±50)g，购自河南省实验动物中心。

1.1.2 试剂 原花青素(安阳晶森天然产物有限公司);iNOS测定试剂盒(南京建成生物工程研究所);MPO测定试剂盒(南京建成生物工程研究所);ASIC1a抗体(美国Sant Cruz公司，批号:C2808);免疫组化试剂盒(北京博奥森试剂公司)。

1.2 方法

1.2.1 分组及给药 将80只SD大鼠随机分为5组，每组16只，即假手术组、模型组及PC低、中、高剂量(50、100、200 mg·kg－1)组。PC 各组分别在缺血前30 min和缺血后2 h腹腔注射相应浓度的PC溶液，假手术组和模型组给与等体积的NS。

1.2.2 脑缺血再灌注模型的制作 采用改良的线栓法［1］建立大鼠左侧脑缺血/再灌注模型。

1.2.3 免疫组化测定ASIC1a的表达 采用抗生物素－生物素－过氧化物酶复合物(ABC)法。按免疫组化试剂盒提供的方法操作，DAB显色，脱水，透明封片。光镜下根据阳性细胞数的多少对染色结果进行半定量分析，分别评为Ⅰ-Ⅳ级。……