许成芳，李小毛，李 田，王小韵

(中山大学附属第三医院妇产科，广东广州 510630)

PTEN基因(phosphatase and tension homolog deleted on chromosome ten)作为一个抑癌基因，与肿瘤的发生发展、转移以及耐药性的产生密切相关。有研究发现，多数子宫内膜癌中都存在PTEN基因的突变，是目前已知的子宫内膜癌中突变率最高的基因［1］。紫杉醇是一种新型的治疗子宫内膜癌的化疗药物，其抗肿瘤机制主要是引起细胞DNA产生不可修复的损伤从而导致细胞凋亡［2］。紫杉醇在临床上的应用日益广泛，但是其非特异性的毒副作用以及晚期或复发的子宫内膜癌患者对其耐药性的增加大大限制了紫杉醇在临床上的应用［3］。因此，本研究拟通过比较紫杉醇对不同PTEN基因状态的子宫内膜癌细胞的作用，探讨PTEN基因在影响紫杉醇疗效中的作用及其可能机制。

1 材料与方法

1.1 细胞株及慢病毒载体 人子宫内膜癌细胞株Ishikawa细胞及HEC-1A细胞由广州市中山大学第三附属医院中心实验室提供。人PTEN基因RNAi慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体购自上海吉凯基因化学有限公司。

1.2 主要试剂 胎牛血清、DMEM培养基购自美国Gibco公司;兔抗 p-AKT单抗购自美国Cell Signaling Technology公司;鼠抗人PTEN购自美国Santa Cruz Biotechnology公司;鼠抗β-actin多克隆抗体购自美国Sigma公司;细胞总蛋白提取试剂盒购自美国Pierce公司;蛋白分子量Marker购自日本Fermentas公司;Annexin V-FITC凋亡试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 细胞培养 Ishikawa及 HEC-1A培养于含10%胎牛血清的DMEM培养基中，培养条件在5%CO2、饱和湿度及37℃下进行。

1.3.2 PTEN基因过表达慢病毒载体和小分子干扰RNA表达慢病毒载体稳定转染 收集对数生长期的细胞，Ishikawa细胞以2.5×105/孔，HEC-1A细胞以5×104/孔铺于6孔板中。……