王凤泽，费洪荣，张显忠，高丽君

(泰山医学院1.生物科学学院、2.医药生物技术研究所、3.药学院，山东 泰安 271016)

原发性肝细胞癌为我国常见的高发性恶性肿瘤，系统化疗是临床常用的治疗方法之一。虽然一些新型药物的应用使肝癌的化疗呈现出新局面，但肿瘤耐药性的存在使得化疗对肝细胞癌的有效性大为降低［1］。乙肝病毒 x蛋白结合蛋白(Hepatitis B x-interacting protein，HBXIP)由于能够与乙肝病毒x蛋白(HBx)的C末端结合而被命名，其在肿瘤组织中高表达，可分别与HBx、survivin和hSuv3p蛋白结合而参与调控 HBv复制、细胞凋亡、有丝分裂及RNA代谢等生命过程［2－5］。我们前期实验结果表明，HBXIP可以通过活化Akt而促进肝癌细胞的增殖［6］;通过调节 cyclinD1、p21 和 p27 等蛋白表达而参与细胞周期的调控［7］。本实验旨在研究HBXIP对阿霉素(doxorubicin hydrochloride，DOX，adriamycin，ADM)诱导肝癌细胞凋亡的抑制作用，并探讨其可能的分子机制，为提高化疗药物的疗效提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 主要材料 人肝癌细胞系HepG2购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心;稳定高表达HBXIP基因的 HepG2细胞系由本室保存［6］。RPM 1640培养基和胎牛血清购于Gibco;DOX购自Sigma;G418和DAPI购自Merck;ECL显色试剂盒购自Pierce;Bcl-2抗体购自Santa Cruz;caspase-3，-9和PARP抗体购自Cell Signaling;β-actin抗体购自Sigma;Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 HepG2细胞用RPMI 1640培养基，含有10%胎牛血清，100 U·L－1青霉素和100 μg·L－1硫酸链霉素，37℃和5%CO2条件下孵箱培养。

1.2.2 MTT分析 接种约4×104个细胞于96孔板中，于37℃、5%CO2培养箱中培养。分别加入适当浓度的DOX于各孔中继续培养24 h。终止培养前4 h加20 μl(5g·L－1)的 MTT 于各个孔中，然后吸去孔中的培养液，再加入150 μl的DMSO，用酶标仪(波长490 nm)测定各孔的A值，设定6个平行孔，对结果进行统计分析。……