黄路芬，董 燕，王 青，周 联，王培训

(广州中医药大学免疫与分子生物学技术研究室，广东广州 510405)

免疫介导的药物超敏反应(IDHR)是一种最常见、也最为复杂的药物不良反应［1］，迄今为止，尚无有效预测IDHR的方法。目前，针对小分子化学物质(low molecular weight compounds，LMWC)或药物致敏潜能的检测方法中，腘窝淋巴结实验(popliteal lymph node assay，PLNA)是被认可、相对常用的筛选、评价技术［2］，已经有超过130种的药物和化学物质运用该方法测试其致敏性，结果与相关部门正式公布出来的结论有较好的一致性［3］。腘窝淋巴结是足趾部注射外源物质发生免疫应答的第一部位和惟一引流淋巴结，因此，在足趾引入的致敏物质势必首先导致腘窝淋巴结及其相关免疫细胞的变化，现有PLNA主要观察淋巴结和淋巴细胞的组织学变化，以及免疫细胞效应阶段的产物。由于细胞表面分子的改变是细胞分化或功能改变的重要标志，因此，本研究通过对PLNA中多种腘窝免疫细胞及其与细胞活化相关的细胞表面分子进行综合评价，以期提高PLNA在预测致敏性或致敏性评价中的可靠性和灵敏性。

1 材料与方法

1.1 动物 ♀ SPF级BALB/c小鼠，6～8周龄，体质量18～22 g，由广东省实验动物中心提供，动物许可证号:SCXK(粤)2008-0002，No.0087659，适应 1周后开始实验。实验在一万级的屏障系统中进行，自由饮食，实验环境执行GB14925-2001标准。

1.2 主要试剂及仪器 氯化汞(HgCl2，贵州省铜仁化学试剂厂);2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)、D-青霉胺(D-pen)、链脲佐菌素(STZ)均购于Sigma公司;APC-cy7 anti-mouse CD4、PE-cy7 anti-mouse CD8、APC anti-mouse B220、FITC anti-mouse CD69、PC-cy7 anti-mouse CD3、PE anti-mouse CD44、APC anti-mouse CD62L、FITC anti-mouse MHC II、PE anti-mouse CD40L、PE-cy7 anti-mouse CD11C、FITC anti-mouse CD40、PE anti-mouse CD86、PE anti-mouse F4/80，均购于美国Biolegend公司或美国eBioscience公司;FACSCantoII流式细胞仪(美国BD公司);GS-15R高速离心机(美国Beckman公司……