潘海敏，方慧华，严士海

(江苏省中医院1.药剂科;2.科技处，南京 210029)

鬼针草药材为菊科管状花亚科鬼针属植物的干燥全草，其药用历史悠久，始载于唐·陈藏器《本草拾遗》［1］。鬼针草有清热解毒、散瘀消肿之功效，目前国内报道鬼针草具有抗菌、抗溃疡、抗肝癌、降脂及降压作用［2-3］。文献［4］报道，鬼针草中黄酮类化合物含有金丝桃苷、奥卡宁、海生菊苷等，是鬼针草中的主要有效成分。为揭示其心血管药理效应，笔者在本实验采用比浊法，以二磷酸腺苷(adenosine diphosphate，ADP)及凝血酶(thrombase，Thr)作诱导剂，考察鬼针草总黄酮对ADP及Thr诱导的兔血小板聚集的影响。

1 材料与方法

1.1 仪器与试药 血小板聚集及血凝测定仪(北京世帝科学仪器公司)，二磷酸腺苷(ADP，Sigma公司)，凝血酶(Thr，Sigma公司)，枸橼酸钠(BDH公司)。鬼针草总黄酮(南京中医药大学提供，批号:20090604)，丹参注射液(正大青春宝药业有限公司，批号:0907082)。

1.2 实验动物 日本大耳白家兔，体质量1.8～2.2 kg，由南京青龙山实验动物繁殖厂提供，动物许可证号SCXK(苏)2007-2008。

1.3 实验方法

1.3.1 血浆样品的制备 取日本大耳白家兔6只，颈总动脉放血，3.8%枸橼酸钠抗凝全血，600 r·min-1离心10 min，吸取上层富血小板血浆(PRP)。再将所剩血液3 500 r·min-1，10 min离心，吸取上清液为贫血小板血浆(PPP)。

1.3.2 动物分组及血小板聚集率测定 用PPP调零，以PRP为血小板供体，实验分为6组，分别为空白对照组，溶媒对照组(给予二甲亚砜溶液)，低、中、高剂量药物组(给予25，50，100 mg·mL-1鬼针草总黄酮溶液)，丹参注射液组，每组6个平行样。分别取PRP250 μL，与不同浓度的药物溶液10 μL 混合，空白对照组给予0.9%氯化钠溶液。37℃温育3 min后，分别加入 20 μmol·L-1的 ADP 20 μL、15 U·mL-1的Thr 20 μL，按文献［1］方法，用血小板聚集及血凝测定仪测定血小板聚集率，并计算抑制率。抑制率(%)=(溶媒对照组最大聚集率－给药组最大聚集率)/溶媒对照组最大聚集率×100%［5-6］。

2 结果

2.1 对ADP诱导的血小板聚集最大聚集率的影响结果见表1。鬼针草总黄酮对ADP诱导的血小板聚集具有较好的抑制作用。

表1 6组ADP诱导的血小板聚集最大聚集率的检测值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

表1 6组ADP诱导的血小板聚集最大聚集率的检测值Tab.1 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by ADP in six groups %，±s

与溶媒对照组比较，*1P＜0.01Compared with vehicle control group，*1P＜0.01

组别 样本/份浓度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼针草总黄酮提取物高剂量药物组 6 100 26.40±4.27*1 45.82中剂量药物组 6 50 34.77±4.56*1 28.65低剂量药物组 6 25 45.88±4.43 5.85丹参注射液组 6 10 μL 37.05±6.24*1 23.97空白对照组 6 51.67±6.06 …溶媒对照组 6 48.73±4.02…

2.2 对Thr诱导的血小板聚集最大聚集率的影响结果见表2。鬼针草总黄酮对Thr诱导的血小板聚集具有较好的抑制作用。

表2 6组Thr诱导的血小板聚集最大聚集率的检测值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

表2 6组Thr诱导的血小板聚集最大聚集率的检测值Tab.2 The detection values of the maximum platelet agglutination induced by Thr in six groups %，±s

与溶媒对照组比较，*1P＜0.01;与空白对照组比较，*2P＜0.05Compared with vehicle control group，*1P＜0.01;Compared with blank control group，*2P＜0.05

组别 样本/份浓度/(mg·mL-1)最大聚集率 抑制率鬼针草总黄酮提取物高剂量药物组 6 100 29.73±4.74*1 48.36中剂量药物组 6 50 38.10±5.84*1 33.82低剂量药物组 6 25 47.55±5.36 17.40丹参注射液组 6 10 μL 38.72±5.64*1 32.74空白对照组 6 63.33±3.94 …溶媒对照组 6 57.57±3.36*2…

3 讨论

血小板聚集指血小板被活化后互相之间黏附并形成聚集物的现象，是形成血栓的重要原因。ADP和Thr等诱导剂均能诱导血小板的活化，但其诱导强度和机制不同。ADP属于中等强度血小板聚集诱导剂，主要通过作用于血小板膜使有限的颗粒内容物释放，经G蛋白连接受体，促进细胞外钙内流而达到促进血小板聚集的作用。而Thr则是一种强诱导剂，可引起不依赖于血小板颗粒分泌的聚集反应，通过凝血酶-血小板膜蛋白糖相互作用诱导聚集反应。

鬼针草是我国常用的中药，具有较大的开发和应用前景。目前，对鬼针草药材及其提取物已经有较多的研究，其化学成分也不断得到阐明。鬼针草总黄酮是保肝作用与降低血压的有效成分［7-9］，鬼针草提取物还具有对抗脂质过氧化反应与降低血脂的作用［10］。本研究结果提示，鬼针草总黄酮具有较好的抗血栓作用，能够抑制ADP和凝血酶所诱导的血小板聚集，剂量效应明显。

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